BspQI
BspQI kann recombinantly an E. coli ausgedréckt ginn, datt spezifesch Siten erkennen kann an ënner produzéiert ginn
BspQI, en IIs Restriktioun Endonuclease Restriktioun Endonuclease, ass ofgeleet vun engem rekombinante E. coli Stamm, deen de gekloonten a modifizéierten BspQI Gen vum Bacillus sphaericus dréit.Et kann spezifesch Siten erkennen, an Unerkennungssequenz a Spaltplaze si wéi follegt:
5' · · · · GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · · · ·
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Produit Fonctiounen
1. Héich Aktivitéit, Schnell Verdauung;
2. Niddereg Stäreaktivitéit, suergt fir genee Ausschneiden wéi "Skalpell";
3. Ouni BSA an Déier-Origine fräi;
Methylatiounsempfindlechkeet
Dam Methylatioun:Net sensibel;
Dcm Methylatioun:Net sensibel;
CpG Methylatioun:Net sensibel;
Stockage Konditiounen
De Produit soll ≤ 0 ℃ verschéckt ginn;Store bei -25 ~ - 15 ℃ Zoustand.
Stockage Puffer
20 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, 500 mM KCl, 1,0 mM dithiothreitol, 500 µg/ml Rekombinant Albumin, 0, 1% Trition X-100 an 50% Glycerol (pH 7,0 @ 25°C).
Eenheet Definitioun
Eng Eenheet ass definéiert wéi d'Quantitéit un Enzym erfuerderlech ass fir 1 µg intern Kontroll DNA an 1 Stonn bei 50 ° C an engem Gesamtreaktiounsvolumen vu 50 µL ze verdauen.
Qualitéitskontroll
Protein Purity Assay (SDS-PAGE):D'Rengheet vun BspQI war ≥95% vun SDS-PAGE Analyse bestëmmt.
RNase:10U vu BspQI mat 1.6μg MS2 RNA fir 4 Stonnen bei 50 ℃ gëtt keng Degradatioun wéi bestëmmt duerch Agarosegel Elektrophorese.
Net spezifesch DNase Aktivitéit:10U vu BspQI mat 1μg λ DNA bei 50 ℃ fir 16 Stonnen, am Verglach mat 50 ℃ fir 1 Stonn, gëtt keng iwwerschësseg DNA wéi bestëmmt duerch Agarosegel Elektrophorese.
Ligation a Recutting:No Verdauung vun 1 μg λDNA mat 10U BspQI, kënnen DNA Fragmenter mat T4 DNA Ligase bei 16ºC ligéiert ginn.An dës ligéiert Fragmenter kënne mat BspQI geschnidden ginn.
E. coli DNA: E. coli 16s rDNA-spezifesch TaqMan qPCR Detektioun huet gewisen, datt E.coli Genom Rescht ≤ 0.1pg /ul.
Host Protein Rescht:≤ 50 ppm
Bakteriell Endotoxin: LAL-Test, laut Chinesesch Pharmacopoeia IV 2020 Editioun, Gellimit Testmethod, allgemeng Regel (1143).Bakteriell Endotoxin Inhalt soll ≤10 EU / mg sinn.
Reaktioun System a Konditiounen
| Komponent | Volumen |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μl |
| DNA | 1mg vun |
| 10 x BspQ ech Buffer | 5 μl |
| dd H2O | Bis zu 50 μL |
Reaktioun Konditiounen: 50 ℃, 1-16 Uhr
Hëtzt Inaktivéierung: 80 ° C fir 20 min.
De empfohlene Reaktiounssystem a Konditioune kënne relativ gudden Enzymverdauungseffekt ubidden, wat nëmme fir Referenz ass, kuckt w.e.g. op d'experimentell Resultater fir Detailer.
Produit Applikatioun
Restriktioun Endonuklease Verdauung, Rapid Klonen.
Notizen
1. De Volume vum Enzym ≤ 1/10 vum Reaktiounsvolumen.
2. Staraktivitéit kann optrieden wann d'Glycerin Konzentratioun méi wéi 5% ass.
3. Spaltaktivitéit kann optrieden wann Substrat ënner dem recommandéierte Verhältnis.
