DNase I
DNase I (Deoxyribonuclease I) ass eng Endodeoxyribonuclease déi eenzel- oder duebelstrengend DNA verdaut kann.Et erkennt a spalt Phosphodiesterbindungen fir Monodeoxynukleotiden oder eenzel- oder duebelstrengeg Oligodeoxynukleotiden ze produzéieren mat Phosphatgruppen um 5'-Terminal an Hydroxyl um 3'-Terminal.D'Aktivitéit vun DNase I hänkt vum Ca2+ of a kann duerch divalent Metallionen wéi Mn2+ an Zn2+ aktivéiert ginn.5mM Ca2+ schützt den Enzym virun der Hydrolyse.A Präsenz vu Mg2+ konnt den Enzym zoufälleg all Site op all Strang vun DNA erkennen a spalten.An der Präsenz vu Mn2+ kënnen déi duebel Stränge vun DNA gläichzäiteg unerkannt ginn an op bal déiselwecht Plaz gespléckt ginn fir flaach Enn DNA Fragmenter oder klebrig Enn DNA Fragmenter mat 1-2 Nukleotiden ze bilden.
Produit Propriétéit
Bovine Bauchspaicheldrüs DNase I gouf am Hef Ausdrock System ausgedréckt a gereinegt.
CBestanddeeler
| Komponent | Volumen | |||
| 0.1 KU | 1 KU | 5 KU | 50 KU | |
| DNase I, RNase-gratis | 20 μL | 200 μL | 1ml vun | 10 ml |
| 10 × DNase ech Buffer | 1ml vun | 1ml vun | 5 x 1 ml | 5 × 10 ml |
Transport a Lagerung
1. Stockage Stabilitéit: - 15 ℃ ~ -25 ℃ fir Stockage;
2.Transport Stabilitéit: Transport ënner Äispäck;
3. Geliwwert an: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% Glycerol, pH 7,6 bei 25 ℃.
Eenheet Definitioun
Eng Eenheet ass definéiert wéi d'Quantitéit un Enzym deen 1 µg pBR322 DNA an 10 Minutten bei 37 ° C komplett ofbaut.
Qualitéitskontroll
RNase:5U vun DNase I mat 1,6 μg MS2 RNA fir 4 Stonnen bei 37 ℃ gëtt keng Degradatioun wéi duerch Agarose Gel Elektrophorese bestëmmt.
Bakteriell Endotoxin:LAL-Test, laut Chinesesch Pharmacopoeia IV 2020 Editioun, Gellimit Testmethod, allgemeng Regel (1143).Bakteriell Endotoxin Inhalt soll ≤10 EU / mg sinn.
Gebrauchsanweisung
1.Preparéiert d'Reaktiounsléisung am RNase-fräie Rouer no de Verhältnisser hei ënnendrënner:
| Komponent | Volumen |
| RNA | X μg |
| 10 × DNase ech Buffer | 1 μl |
| DNase I, RNase-gratis (5U/μL) | 1 U pro μg RNA |
| ddH2O | Bis zu 10 μL |
2,37 ℃ fir 15 Minutten;
3.Fügt den Terminatiounsbuffer fir d'Reaktioun ze stoppen, a waarm bei 65 ℃ fir 10 Minutten fir DNase I ze inaktivéieren. D'Probe kann direkt fir den nächste Transkriptiounsexperiment benotzt ginn.
Notizen
1.Use 1U DNase I pro μg RNA, oder 1U DNase I fir manner wéi 1μg RNA.
2.EDTA soll zu enger Finale Konzentratioun vu 5 mM bäigefüügt ginn fir d'RNA ze schützen géint degradéiert ze ginn während Enzyminaktivéierung.
