RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Dëst Produkt enthält Reaktiounsbuffer, RT-Enzyme Mix (Bst DNA Polymerase an Hëtztbeständeg ëmgedréint Transkriptase), lyophiliséierte Protectants a chromogene Faarfkomponenten.Fir ze benotzen, benotzt just Buffer, d'Reaktiounsenzym an de Primer ginn gemëscht an an d'Schabloun bäigefüügt;lyophilized Protectant derbäi kann direkt sinn.Et gouf mat engem Lyophilisator verbonnen a lyophiliséiert, an nëmmen d'Primeren an d'Schablounen goufen derbäigesat wann se benotzt goufen.Dëse Kit bitt eng séier, kloer visuell Detektioun vun der Verstäerkung, déi negativ Reaktioun a rout ugewise gëtt a positiv Reaktioun gëtt duerch eng Ännerung op giel uginn.
Komponent
| Komponent | HCB5204A-01 Ubidder | HCB5204A-02 Ubidder | HCB5204A-03 Ubidder |
| Loop-mediated Amplification Buffer (mat Faarf) | 0,96ml | 4,80 ml × 2 | 9,60 ml × 10 |
| RT-Enzymen Mix | 270 l | 2,70 ml | 2,70 ml × 10 |
| Lyophiliséierte Schutzmëttel | 0,96 ml × 2 | 9,60 ml × 2 | 9,60 ml × 20 |
Uwendungen
Fir DNA oder RNA isothermesch Amplifikatioun.
Stockage Konditiounen
Transportéiert mat Dréchent Äis, gelagert bei -25 ~ -15 ℃.Vermeiden heefeg Afréiere-Thaw, d'Produkt ass valabel fir 12 Méint.
Protokoll
1.Thaw de Reaktiounsbuffer fir bei Raumtemperatur ze benotzen.Vortex kuerz oder ëmdréinen d'Tuber e puer Mol fir grëndlech ze vermëschen, centrifugéiert dann fir d'Flëssegkeet um Buedem vum Rouer ze sammelen.
2.Virbereedung vum Reaktiounssystem.Dëse Reagens kann an zwee Reaktiounssystemer virbereet ginn, flësseg Reaktiounsmix a lyophiliséierte Systemmix.
1) Flesseg Reaktiounsmëschung virbereeden
| Komponent | Volumen |
| Loop-mediated Amplification Buffer (mat Faarf) | 10 μL |
| RT-Enzymen Mix | 2,8 l |
| 10 × Primer Mixa | 5 μl |
| Schablounen DNA / RNA b | × μL |
| Nuklease-gratis Waasser | Bis zu 50 μL |
2) Lyophilization System Mix
① Preparéiert lyophiliséierter Mëschung
| Komponent | Volumen |
| Loop-mediated Amplification Buffer (mat Faarf) | 10 μL |
| Lyophiliséierte Schutzmëttel | 20 μL |
| RT-Enzymen Mix | 2,8 l |
| Nuklease-gratis Waasser | Bis zu 50 μL |
② Lyophiliséierung: Déi preparéiert Mëschung gouf an engem 50μL System lyophiliséiert
③ Reaktiounsmëschung virbereeden
| Komponent | Volumen |
| Lyophiliséierter Mëschung | 1 Stéck |
| 10 × Primer Mixa | 5 μl |
| Schablounen DNA / RNA b | × μL |
| Nuklease-gratis Waasser | Bis zu 50 μL |
Notizen:
1) a.10 × Primer Mix : 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) b.DEPC (Waasserlöslech) gëtt fir Nukleinsäure Templ recommandéiert.
1.Inkubéiert bei 65 ° C fir 30-45mins, wat entspriechend verlängert ka ginn no Faarf änneren Reaktiounszäit.
2.Laut bloussem A war giel positiv a rout war negativ.
Notizen
1.Salz kann um Buedem vum Pufferröhre optrieden, kuerz vortexen oder d'Réier e puer Mol ëmdréinen fir grëndlech bei Raumtemperatur ze vermëschen.
2.D'Reaktiounstemperatur kann tëscht 62 ℃ an 68 ℃ optimiséiert ginn no dem Zoustand vun de Primer.
3.Déi verpackte Reagenz sollen net laang an d'Loft ausgesat ginn.
4.Déi rout a giel Verfärbungsreaktioun hänkt vun der pH Ännerung vum Reaktiounssystem of, benotzt w.e.g. net déi enthalen Tris Nukleinsäure Späicherléisung, recommandéiert fir ddH ze benotzen2O gespäichert Nukleinsäure;
5.D'Experiment soll standardiséiert ginn, dorënner d'Virbereedung vun der Reaktioun System, lyophilization, an Prouf Veraarbechtung a Prouf dobäi Prozess;
6.Fir Kontaminatioun ze vermeiden, ass et recommandéiert de Reaktiounssystem an enger ultra-propper Bänk ze preparéieren, an anere Schablounen op d'Fume Hood vum Raum ze addéieren fir falsch positiv Interferenz ze vermeiden.
