Ultra Nuclease
UltraNuclease ass eng genetesch manipuléiertendonuclaese ofgeleet vu Serratia marcescens, déi fäeg ass DNA oder RNA ze degradéieren, entweder duebel oder eenzegstrengeg, linear oder kreesfërmeg ënner enger breet Palette vun Bedingungen, komplett Nukleinsäuren an 5'-Monophosphat Oligonukleotiden mat 3-5 Baselängt degradéieren. .No der Gentechnik Modifikatioun gouf d'Produkt fermentéiert, ausgedréckt a gereinegt an Escherichia coli (E. coli), wat d'Viskositéit vun der Zellsupernatant an Zelllysat wëssenschaftlech Fuerschung reduzéiert, awer och d'Rengungseffizienz a funktionell Fuerschung vum Protein verbessert.Et kann och an der Gentherapie, Virusreinigung, Impfungproduktioun, Protein- a Polysaccharid-pharmazeutescher Industrie als Gaaschtreschter Nukleinsäureentfernungsreagens benotzt ginn.
Produit Fonctiounen
| CAS Nr. | 9025-65-4 |
| EC Nr. | |
| Molekulare Gewiicht | 30 kDa |
| Isoelektresche Punkt | 6,85 |
| Protein Rengheet | ≥99%（SDS-PAGE & SEC-HPLC） |
| Spezifesch Aktivitéit | ≥1.1 × 106 U/mg |
| Optimal Temperatur | 37°C |
| Optimal pH | 8.0 |
| Protease Aktivitéit | negativ |
| Biobelaaschtung | ＜10 CFU/100.000 U |
| Residual Hostzell Protein | ≤10 ppm |
| Heavy Metal | ≤10 ppm |
| Bakteriell Endotoxin | ＜0.25EU/1000U |
| Stockage Buffer | 20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 mM MgCl2, 20 mM NaCl, 50% Glycerol |
Stockage Konditiounen
≤0 ° C Transport; -25 ~ -15 ° C Stockage, 2 Joer Validitéit (evitéieren Afréiere-thawing).
Eenheet Definitioun
D'Quantitéit vun Enzym benotzt der Absorptioun Wäert vun △A260 vun 1,0 bannent 30min bei 37 ° C, pH 8,0 z'änneren, gläichwäerteg zu verdaut 37μg Lachs Sperma DNA vun opzedeelen an oligonucleotides, war als aktiv Eenheet (U) definéiert.
Qualitéitskontroll
Residual Hostzell Protein: ELISA Kit
•Protease Reschter: 250KU/mL UltraNuclease reagéiert mat Substrat fir 60min, keng Aktivitéit gouf festgestallt.
•Bakteriell Endotoxin: LAL-Test, Pharmacopoeia of the People's Republic of China Volume 4 (2020 Edition) Gel Limit Test Method.Allgemeng Regelen (1143).
•Biobelaaschtung: Pharmacopoeia of the People's Republic of China Volume 4 (2020 Editioun) - Allgemeng
Regele fir Sterility Test (1101), PRC National Standard, GB 4789.2-2016.
•Heavy Metal:ICP-AES, HJ776-2015.
Operatioun
UltraNuclease Aktivitéit war wesentlech inhibited wann SDS Konzentratioun iwwer 0,1% oder EDTA war
Konzentratioun war iwwer 1mM.Surfactant Triton X- 100, Tween 20 an Tween 80 haten keen Effekt op Nuklease
Eegeschafte wann d'Konzentratioun ënner 1,5% war.
| Operatioun | Optimal Operatioun | Valabel Operatioun |
| Temperatur | 37 ℃ | 0-45 ℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6,0-11,0 |
| Mg2+ | 1-2 mM | 1-15 mm |
| DTT | 0-100 mm | > 100 mM |
| 2-Mercaptoethanol | 0-100 mm | > 100 mM |
| Monovalent Metallion (Na+, K+ etc.) | 0-20 mM | 0-200 mm |
| PO43- | 0-10 mM | 0-100 mm |
Benotzung an Doséierung
• Ewechzehuelen exogene Nukleinsäure aus Impfstoff Produiten, reduzéieren de Risiko vun Rescht Nukleinsäure toxicity a verbesseren Produit Sécherheet.
• Reduzéieren d'Viskositéit vu Fudderflëssegkeet, déi duerch Nukleinsäure verursaacht gëtt, d'Veraarbechtungszäit verkierzen an d'Protein-Ausbezuelung erhéijen.
• Entfernt d'Nukleinsäure déi de Partikel gewéckelt huet (Virus, Inklusiounskierper, asw.), wat förderlech ass
zur Verëffentlechung an der Reinigung vum Partikel.
| Experimentell Typ | Protein Produktioun | Virus, Impfung | Zell Drogen |
| Zell Zuel | 1g Zell naass Gewiicht (resuspendéiert mat 10ml Puffer) | 1 L Fermentatioun Flësseg Supernatant | 1L Kultur |
| Minimum Doséierung | 250 U | 100 U | 100 U |
| Recommandéiert Doséierung | 2500 U | 25 000 U | 5000 U |
• Nuclease Behandlung kann d'Resolutioun an d'Erhuelung vun der Probe fir Kolonnchromatographie, Elektrophorese a Blottinganalyse verbesseren.
• An der Gentherapie gëtt d'Nukleinsäure ewechgeholl fir gereinegt Adeno-assoziéiert Viren ze kréien.
