Warm Start Bst 2.0 DNA Polymerase (Glycerol fräi)
Bst DNA Polymerase V2 ass ofgeleet vu Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, déi 5'→3'DNA Polymerase Aktivitéit a staark Kettenersatzaktivitéit huet, awer keng 5'→3' Exonuklease Aktivitéit.Bst DNA Polymerase V2 ass ideal gëeegent fir Strang-Verschiebung, isothermesch Amplifikatioun LAMP (Loop-mediéiert isothermesch Amplifikatioun) a séier Sequenzéierung.Bst DNA Polymerase V2 ass eng Hot-Start Versioun baséiert op Bst DNA Polymerase V2 (HC5005A) kritt duerch reversibel Modifikatioun Technologie, déi DNA Polymerase Aktivitéit bei Raumtemperatur hemméiere kann, sou datt de Reaktiounssystem bei Raumtemperatur operéiert a formuléiert ka ginn fir net ze vermeiden -spezifesch amplification a verbesseren Reaktioun Effizienz, an dëser Versioun kann lyophilized ginn.Ausserdeem gëtt seng Aktivitéit bei héijen Temperaturen verëffentlecht, sou datt et kee Besoin fir eng separat Aktivéierungsschrëtt ass.
Komponenten
| Komponent | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA Polymerase V2 (Glycerol-fräi) (8U/μL) | 0,2ml | 1 mll | 10 ml |
| 10 × HC Bst V2 Buffer | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 3 × 10 ml |
| MgSO4(100 mm) | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 2 × 10 ml |
Uwendungen
1.LAMP isothermesch Amplifikatioun
2.DNA Strang eenzeg Verdrängungsreaktioun
3.Héich GC Gen sequencing
4.DNA Sequenzéierung vum Nanogrammniveau.
Stockage Zoustand
Transport ënner 0 ° C a bei -25 ° C ~ -15 ° C gelagert ginn.
Eenheet Definitioun
Eng Eenheet gëtt definéiert wéi d'Quantitéit un Enzym deen 25 nmol dNTP an sauer onopléisbar Material an 30 Minutten bei 65 ° C integréiert.
Qualitéitskontroll
1.Protein Purity Assay (SDS-PAGE):D'Rengheet vu Bst DNA Polymerase V2 ass ≥99% bestëmmt duerch SDS-PAGE Analyse mat Coomassie Blue Detektioun.
2.EndonukleaseAktivitéit:D'Inkubatioun vun enger 50 μL Reaktioun mat engem Minimum vun 8 U Bst DNA Polymerase V2 mat 1 μg λDNA fir 16 Stonnen bei 37 ℃ féiert zu keng detektéierbaren Degradatioun wéi bestëmmt.
3.Exonuclease Aktivitéit:Inkubatioun vun enger 50 μL Reaktioun mat engem Minimum vun 8 U vun Bst DNA Polymerase V2 mat 1 μg λ -Hind Ⅲ Verdauung DNA fir 16 Stonnen bei 37 ℃ Resultater zu keng detektabel Degradatioun wéi bestëmmt.
4.Nickase Aktivitéit:Inkubatioun vun enger 50 μL Reaktioun mat engem Minimum vun 8 U vun Bst DNA Polymerase V2 mat 1 μg pBR322 DNA fir 16 Stonnen bei 37 ° C Resultater zu keng detektabel Degradatioun wéi bestëmmt.
5.RNase Aktivitéit:Inkubatioun vun enger 50 μL Reaktioun mat engem Minimum vun 8 U vun Bst DNA Polymerase V2 mat 1,6 μg MS2 RNA fir 16 Stonnen bei 37 ° C Resultater zu keng detektabel Degradatioun wéi bestëmmt.
6.E. coliDNA:120 U vu Bst DNA Polymerase V2 gëtt gescannt fir d'Präsenz vun E. coli genomesch DNA mat TaqMan qPCR mat Primer spezifesch fir den E. coli 16S rRNA Locus.D'E. coli genomesch DNA Kontaminatioun ass ≤1 Kopie.
LAMP Reaktioun
| Komponenten | 25μL |
| 10 × HC Bst V2 Buffer | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 mm) | 1,5 μL |
| dNTPs (10 mM jee) | 3,5 l |
| SYTO™ 16 Gréng (25×)a | 1,0 μL |
| Primer Mixb | 6ml |
| Bst DNA Polymerase V2 (Glycerol-gratis) (8 U/uL) | 1 μl |
| Schabloun | × μL |
| ddH₂O | Bis zu 25 μL |
Notizen:
1) a.SYTOTM 16 Gréng (25 ×): No experimentell Besoinen, aner Faarfstoffer kann als Ersatzspiller benotzt ginn;
2) b.Primer Mëschung: kritt duerch Mëschung vun 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB an aner Volumen.
Reaktioun an Zoustand
1 × HC Bst V2 Buffer, d'Inkubatiounstemperatur ass tëscht 60 ° C an 65 ° C.
Hëtzt Inaktivéierung
80°C, 20 min
