2 × HiF Taq plus Master Mix
Katalognummer: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (Mat Dye) ass eng prett-ze-benotzen 2 × premixed Léisung mat Plus HIF DNA Polymerase, dNTPs, an optimiséiert Puffer.Zwee monoclonal Antikörper bei Raumtemperatur, déi d'Polymeraseaktivitéit an d'3′→5'Exonukleaseaktivitéit hemmen, ginn an d'Mastermix bäigefüügt fir einfach an héich spezifesch Hot Start PCR.Den Extensiounsfaktor gëtt an d'Mastermix bäigefüügt fir dem Enzym eng laang Fragmentverstärkungskapazitéit ze ginn, d'Längt vun der Amplifikatioun kann bis zu 13 kb sinn, den Enzym huet eng 5′→3′ DNA Polymerase Aktivitéit an eng 3′→5′ Exonuklease Aktivitéit, seng Vertrauen ass 83 Mol déi vun Taq DNA Polymerase, dat ass 9 Mol déi vun normaler DNA Polymerase.Et ass gëeegent fir Verstäerkung vu komplexe Templates, d'Verstäerkungsprodukt ass e stompegen Enn.
2×HIF Taq plus Master Mix (Mat Dye) huet d'Virdeeler vu séier an einfach, héich Empfindlechkeet, staark Spezifizitéit, gutt Stabilitéit, asw. Schrëtt Protokoll, déi experimentell Schrëtt vereinfacht an Zäit spueren.Dëst Produkt enthält Elektrophorese Indikator Faarfstoffer, an PCR Produkter kënnen direkt fir Elektrophorese benotzt ginn.Zousätzlech enthält d'Produkt och e spezifesche Schutzmëttel, sou datt d'Mastermix stabil Aktivitéit behalen kann no widderholl Gefriess-Thaw.
Stockage Konditiounen
Produkter solle bei -25 ~ -15 ℃ fir 1 Joer gelagert ginn.
Spezifikatioune
| Produit Spezifizéierung | Master Mix |
| Konzentratioun | 2× |
| Hot Start | Built-in Hot Start |
| Iwwerhang | Blunt |
| Reaktioun Vitesse | Schnell |
| Gréisst (Finale Produit) | Bis zu 13 kb |
| Konditioune fir Transport | Dréchen Äis |
| Produit Typ | High Fidelity PCR Premixes |
Uweisungen
1.PCR Reaktioun System
| Komponenten | Volumen (μL) |
| DNA Schabloun | Gëeegent |
| Forward Primer (10 μmol/L) | 2.5 |
| Reverse Primer (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2 × HIF Taq plus Master Mix | 25 |
| ddH2O | zu 50 |
2.Recommandéiert Benotzung vu verschiddene Templates
| Typ vun Schabloun | Amplifizéiert Fragmenter vun 1kb op 10kb |
| Genomesch DNA | 50-200 ng |
| Plasmid oder Viral DNA | 10pg-20ng |
| cDNA | 1-2,5 µL (net méi wéi 10% vum finalen PCR Reaktiounsvolumen iwwerschreiden) |
3.Amplifikatioun Protokoll
1) Zwee-Schrëtt Protokoll (Komplexitéit Schabloun)
| Cycle Schrëtt | Temp. | Zäit | Cyclen |
| Éischt Denaturatioun | 98 ℃ | 3 min | 1 |
| Denaturatioun | 98 ℃ | 10 sec | 30-35 |
| Erweiderung | 68 ℃ | 30 sec/kb | |
| Finale Verlängerung | 72℃ | 5 min | 1 |
2) Dräi-Schrëtt Protokoll (normale Protokoll)
| Cycle Schrëtt | Temp. | Zäit | Cyclen |
| Éischt Denaturatioun | 98 ℃ | 3 min | 1 |
| Denaturatioun | 98 ℃ | 10 sec | 30-35 |
| Annealing | 60 ℃ | 20 sec | |
| Erweiderung | 72℃ | 30 sec/kb | |
| Finale Verlängerung | 72℃ | 5 min | 1 |
3) Annealing Gradient Protocol (Komplexitéit Schabloun)
| Cycle Schrëtt | Temperatur | Zäit | Cyclen |
| Éischt Denaturatioun | 98 ℃ | 3 min | 1 |
| Denaturatioun | 98 ℃ | 10 sec | 15 (1 ℃ Reduktioun pro Zyklus) |
| Gradient annealing | 70-55 ℃ | 20 sec | |
| Erweiderung | 72℃ | 30 sec/kb | |
| Denaturatioun | 98 ℃ | 10 sec |
20 |
| Annealing | 55 ℃ | 20 sec | |
| Erweiderung | 72℃ | 30 sec/kb | |
| Finale Verlängerung | 72℃ | 5 min | 1 |
Fonctiounen ënner verschiddene amplification Protokoll
| Protokolll | Zwee-Schrëtt | Dräi-Schrëtt | Gradient annealing |
| Spez. | séier | mëttel | lues |
| Spezifizitéit | héich | mëttel | héich |
| PCR Rendement | mëttel | héich | mëttel |
| Detektiounsquote | héich | mëttel | héich |
Notizen
Gitt w.e.g. déi néideg PPE, sou Labo Mantel an Handschuesch, fir Är Gesondheet a Sécherheet ze garantéieren!
