M-MLV Reverse Transkriptase
RevScript Reverse Transkriptase gëtt duerch genetesch Ingenieurstechnologie kritt.Et huet méi héich cDNA Synthesefäegkeet, thermesch Stabilitéit a Reaktiounstemperaturlimit (bis zu 60 ° C).De synthetiséierte cDNA Produkt ass bis zu 10 kb.Et verbessert d'Affinitéit vun de Templates an ass gëeegent fir ëmgedréint Transkriptioun vun RNA Templates mat komplexer sekundärer Struktur oder nidderegen Kopie Genen.
Komponenten
| Komponent | HC2003B-01 (10.000 U) | HC2003B-02 (5*10.000U) | HC2003B-03 (200.000 U) |
| RevScript Reverse Transcriptase (200U/μL) | 50 μl | 5×50 μL | 1 mll |
| 5 × RevScript Buffer | 250 l | 1,25 ml | 5ml vun |
Stockage Zoustand
Dëst Produkt soll bei -25 ° C ~ -15 ° C fir 2 Joer gelagert ginn.
Eenheet Definitioun
Eng Eenheet integréiert 1 nmol dTTP an sauer-onlöslech Material an 10 Minutten bei 37 ° C mat Oligo (dT) als Primer.
Reaktioun Setup
1.Denaturatioun vun der RNA Schabloun (Dëse Schrëtt ass fakultativ, Denaturatioun vun der RNA Schabloun hëlleft fir déi sekundär Strukturen opzemaachen, wat d'Ausbezuelung vum éischte Strang cDNA verbessert.)
| Komponenten | Volumen (μL) |
| RNase fräi ddH2O | Bis den 13 |
| Oligo (dT)18 (50 μmol/L) oder Random Primer (50 μmol/L) Oder Genspezifesch Primer (2 μmol/L) | 1 |
| oder 1 | |
| oder 1 | |
| RNA Schabloun | Xa |
Notizen:
1) a: Total RNA: 1-5 ug oder mRNA: 1-500 ng
2) Inkubéieren bei 65 ° C fir 5 Minutten, dann iwwerdroen op Äis direkt fir 2 Minutten ze killen.Kuerz Zentrifugéierung fir Reaktiounsflëssegkeet ze sammelen, füügt déi ëmgedréint Transkriptiounsreaktiounsléisung wéi an der folgender Tabell gewisen.Pipette sanft fir ze vermëschen.
1. Virbereedung vun der Reaktiounsmëschung (20 μL Volumen)
| Komponenten | Volumen (μL) |
| Mëschung aus virdrun Schrëtt | 13 |
| 5 × Buffer | 4 |
| dNTP Mix (10 nmol/L) | 1 |
| Reverse Transkriptase (200 U/μL) | 1 |
| RNase Inhibitor (40 U/μL) | 1 |
1.Maacht d'Reaktioun ënner de folgende Konditiounen:
| Temperatur (°C) | Zäit |
| 25 °Ca | 5 min |
| 42 °Cb | 15-30 Min |
| 85 °Cc | 5 min |
Notizen:
1) a.Inkubatioun bei 25 ° C fir 5mins ass erfuerderlech nëmme fir déi zoufälleg Hexameren ze benotzen.Sprang w.e.g. dëse Schrëtt wann Dir Oligo (dT) benotzt18oder Gene spezifesch Primer.
2) b.D'recommandéiert ëmgedréint Transkriptiounstemperatur ass 42 ° C, Fir Schabloune mat komplizéierte sekundäre Strukturen oder héije GC Inhalt ass et recommandéiert d'Reaktiounstemperatur op 50-55 ° C ze erhéijen.
3) c.Heizung bei 85 ° C fir 5mins fir ëmgedréint Transkriptase ze inaktivéieren.
4) D'Produkt kann direkt an PCR oder qPCR Reaktiounen benotzt ginn, oder bei -20 ° C fir kuerzfristeg Lagerung gespäichert ginn.Et ass recommandéiert d'Produkter ze alignéieren a bei -80 ° C fir laangfristeg Lagerung ze späicheren.Vermeiden heefeg Afréiere-Thaw.
5) D'Produkt ass gëeegent fir een-Schrëtt RT-qPCR, et ass recommandéiert 10-20 U ëmgedréint Transkriptase fir all 25μL Reaktiounssystem ze addéieren, oder graduell d'Quantitéit vum ëmgedréint Transkriptase no der aktueller Situatioun erhéijen.
Notizen
1.Halt w.e.g. den experimentellen Beräich propper;Propper Handschuesch a Masken sollten während der Operatioun gedroe ginn.All d'Verbrauchsmaterial, déi am Experiment benotzt ginn, sollten RNase gratis sinn fir RNase Kontaminatioun ze vermeiden.
2.All Prozedure sollen op Äis gemaach ginn fir d'RNA-Degradatioun ze verhënneren.
3.High Qualitéit RNA Echantillon sinn recommandéiert fir héich Effizienz vun ëmgedréint Transkriptioun ze garantéieren.
4.This Produkt ass nëmme fir Fuerschung benotzt.
5.Operéiert w.e.g. mat Labo-Mäntel a Wegwerfhandschuesch, fir Är Sécherheet.
