One Step Fast RT-qPCR Probe Premix-UNG
Cat No: HCR5143A
One Step RT-qPCR Sonde Kit (FIR FAST) ass e Sonde-baséiert RT-qPCR séier Detektiounskit gëeegent fir Single-Plex oder Multiplex quantitativ PCR mat RNA als Schabloun (wéi RNA Virus).Dëst Produkt benotzt eng nei Generatioun vun Antikörper modifizéierten Taq DNA Polymerase an engem Schrëtt engagéierten Reverse Transcriptase, mat engem optimiséierte Puffer fir séier Verstäerkung, déi méi séier Verstäerkungsgeschwindegkeet, méi héich Amplifikatiounseffizienz a Spezifizitéit huet.Et ënnerstëtzt equilibréiert Verstäerkung souwuel Single-Plex a Multiplex vun niddereg an héich Konzentratioun Echantillon a kuerzer Zäit.
Komponenten
1. 5 × RT-qPCR Puffer (U+)
2. Enzymmix (U+)
Notizen:
a.5 × RT-qPCR Puffer (U+) enthält dNTP a Mg2+;
b.Enzymmix (U+) enthält ëmgedréint Transkriptase, Hot Start Taq DNA Polymerase, RNase Inhibitor an UDG;
c.Benotzt RNase-Free Tipps, EP Tubes, etc.
Virun der Benotzung grëndlech vermëschen den 5 × RT-qPCR Puffer (U+).Wann et Nidderschlag gëtt nom Ofdeckung, waart bis de Puffer op Raumtemperatur zréckkënnt, mëschen an opléisen, a benotzt se dann normalerweis.
Stockage Konditiounen
D'Produkt gëtt mat trockenem Äis verschéckt a ka bei -25 ~ -15 ℃ fir 1 Joer gelagert ginn.
Uweisungen
1. Reaktioun System
| Komponenten | Volumen (20 μL Reaktioun) |
| 2 × RT-qPCR Puffer | 4 μl |
| Enzymmix (U+) | 0,8 μL |
| Primer Forward | 0,1 ~ 1,0 μM |
| Primer Reverse | 0,1 ~ 1,0 μM |
| TaqMan Probe | 0,05 ~ 0,25 μM |
| Schabloun | X μL |
| RNase-Free Waasser | bis 25 μL |
Notizen: Reaktiounsvolumen ass 10-50μL.
2. Cycling Protokoll (Standard)
| Zyklus Schrëtt | Temp. | Zäit | Cyclen |
| Reverse Transkriptioun | 55 ℃ | 10 min | 1 |
| Éischt Denaturatioun | 95 ℃ | 30 sec | 1 |
| Denaturatioun | 95 ℃ | 10 sec | 45 |
| Annealing / Extensioun | 60 ℃ | 30 sec |
| Cycling Protokoll (Schnell) Zyklus Schrëtt |
Temp. |
Zäit |
Cyclen |
| Reverse Transkriptioun | 55 ℃ | 5 min | 1 |
| Éischt Denaturatioun | 95 ℃ | 5 s | 1 |
| Denaturatioun | 95 ℃ | 3 s | 43 |
| Annealing / Extensioun | 60 ℃ | 10 s |
Notizen:
a.Reverse Transkriptiounstemperatur ass tëscht 50 ℃ bis 60 ℃, d'Erhéijung vun der Temperatur hëlleft komplex Strukturen an héije CG Inhalt Templates ze verstäerken;
b.Déi optimal annealing Temperatur muss baséiert op der Tm Wäert vun der primer ugepasst ginn, a wielt déi kuerz Zäit fir Fluoreszenz Signal Kollektioun baséiert op der Real Time PCR Instrument.
Notizen
Gitt w.e.g. déi néideg PPE, sou Labo Mantel an Handschuesch, fir Är Gesondheet a Sécherheet ze garantéieren!
