5 × Neoscript Fast RT-qPCR Premix plus-UNG
Cat No: HCB5142A
Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) ass eng héich stabil One-Tube Sonde-baséiert Mëschung gëeegent fir One-Step Reverse Transkriptioun a quantitative PCR (qRT-PCR).Et ënnerstëtzt d'Pre-Mëschung vu Primer a Sonden a bleift stabil no laanger Lagerung bei niddreger Temperatur.D'Probe fir ze testen kann direkt bäigefüügt ginn wann Dir benotzt, ouni zousätzlech Röhreöffnung / Pipetteoperatioun.Dëst Produkt liwwert Komponenten, zB Hot-Start DNA Polymerase, M-MLV, Hëtztlabile uracil DNA Glycosylase (TS-UNG), RNase Inhibitor, MgCl2, dNTPs (mat dUTP amplaz dTTP), a Stabilisatoren.Mat der genetesch modifizéierter rapider Amplifikatioun ëmgedréint Transkriptase an DNA Polymerase ass et méiglech d'PCR Amplifikatioun bannent 20-40 Minutten ofzeschléissen.Dëse Reagens benotzt spezielle Puffer fir qPCR mat gemëschten Enzyme vum anti-inhibitoreschen Amplifikatiounsenzym an UNG Enzym.Dofir kann et gutt Verstäerkung vun Zilgenen kréien a falsch Verstäerkung verhënneren, déi duerch PCR Reschter an Aerosolverschmotzung verursaacht gëtt.Dëse Reagens ass kompatibel mat de meeschte Fluoreszenz quantitative PCR Instrumenter vu Hiersteller wéi Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad a Roche.
Komponent
1.25 × Neoscript Fast RTase / UNG Mix
2.5 × Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP)
Stockage Konditiounen
All Komponente solle bei -20 ℃ fir laangfristeg Lagerung a 4 ℃ fir bis zu 3 Méint gehal ginn.Maacht w.e.g. grëndlech nom Ofdeckung a centrifugéiert virum Gebrauch.Vermeiden heefeg Afréiere-Thaw.
qRT-PCR Reaktioun System Virbereedung
| Komponenten | 25μLSystem | 50μLSystem | Finale Konzentratioun |
| 5 × Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP) | 5 μl | 10 μL | 1× |
| 25 × Neoscript Fast RTase / UNG Mix | 1 μl | 2 μl | 1× |
| 25 × Primer-Sonde Mixa | 1 μl | 2 μl | 1× |
| Schabloun RNAb | - | - | - |
| ddH2O | Bis zu 25 μL | Bis zu 50 μL | - |
1) a.D'Finale Konzentratioun vun primer ass normalerweis 0.2μM.Fir besser Resultater kann d'Primer Konzentratioun am Beräich vun 0,2-1μM optimiséiert ginn.Allgemeng kann d'Sondkonzentratioun am Beräich vun 0,1-0,3μM optimiséiert ginn.
2) b.Wann Dir eng séier PCR Prozedur benotzt, d'Erhéijung vun der Konzentratioun vu Primer a Sonden kann zu bessere Amplifikatiounsresultater resultéieren, an hir Verhältnis soll deementspriechend optimiséiert ginn.
3) Verschidden Zorte vu Echantillon enthalen verschidden Zorte an Inhalt vun inhibitor a Kopie Zuel vun Zil- Gen.De Probevolumen soll no aktuellen Zoustand berücksichtegt ginn.Maacht eng Verdünnung vun der Probe mat nukleasefräi Waasser oder TE Buffer, wann néideg.
Reaktioun CKonditiounen
| Regelméisseg PCR Prozedur | Schnell PCR Prozedur | ||||||
| Prozedur | Temp. | Zäit | Zyklus | Prozedur | Temp. | Zäit | Zyklus |
| Reverse Transkriptioun | 50 ℃ | 10-20 Min | 1 | Reverse Transkriptioun | 50 ℃ | 5 min | 1 |
| Polymerase Aktivéierung | 95 ℃ | 1-5 Minutten | 1 | Polymerase Aktivéierung | 95 ℃ | 30s | 1 |
| Denaturatioun | 95 ℃ | 10-20 Uhr | 40-50 | Denaturatioun | 95 ℃ | 1-3s | 40-50 |
| Annealing an Erweiderung | 56-64 ℃ | 20-60s | Annealing an Erweiderung | 56-64 ℃ | 3-20s | ||
Qualitéitskontroll
1.Funktiounserkennung: Sensibilitéit, Spezifizitéit a Widderhuelbarkeet vu qPCR.
2.Keng exogen Nuklease Aktivitéit: keng exogen Endonuklease an Exonuklease Verschmotzung.
Notizen
1.Amplifikatiounsquote vu schnelle DNA Polymerase ass net manner wéi 1kb/10s.Verschidde PCR Instrumenter hu verschidden Heiz- a Killgeschwindegkeeten, Temperaturkontrollmodi an thermesch Konduktivitéit, an dofir ass d'Optimisatioun vun Ärer Primer / Sonde Konzentratioun a Lafmethod a Kombinatioun mat Ärem spezifesche schnelle PCR Instrument wesentlech.
2.Dëst Produkt mécht breet Uwendung, an et ass gëeegent fir héichempfindlech molekulare Diagnostik.Dräi-Schrëtt PCR Method ass recommandéiert fir Primer mat niddereg annealing Temperatur oder fir amplification vun laange Fragmenter iwwer 200 bp.
3.Zënter verschidden Amplikonen ënnerschiddlech Benotzungseffizienz vun dUTP a verschidde Empfindlechkeet fir UNG hunn, sollten d'Reagenz optimiséiert ginn wann d'Detektiounsempfindlechkeet erof geet wann Dir UNG System benotzt.Weg Kontakt eis fir technesch Ënnerstëtzung wann néideg.
4.Fir Verstäerkung vun Iwwerdroung PCR Produkter ze vermeiden, sinn engagéierten experimentell Beräich a Pipette fir Amplifikatioun erfuerderlech.Operéiert mat Handschuesch a ännert dacks a maach de PCR-Tube net no der Verstäerkung op.
