Ronn A
Ribonuclease A (RNaseA) ass en eenzegstrengeg Polypeptid mat 4 Disulfidbindungen mat engem Molekulargewicht vun ongeféier 13,7 kDa.RNase A ass eng Endoribonuklease déi spezifesch eenzegstrengeg RNA bei C an U Reschter degradéiert.Speziell erkennt d'Spaltung d'Phosphodiester-Bindung, déi duerch d'5'-Ribose vun engem Nukleotid an der Phosphatgrupp op der 3'-Ribose vum ugrenzende Pyrimidin-Nukleotid geformt gëtt, sou datt d'2,3'-Cyclesch Phosphate hydrolyséiert ginn op déi entspriechend ′Nukleosidphosphate (zB pG-pG-pC-pA-pG gëtt vun RNase A gespléckt fir pG-pG-pCp an A-PG ze generéieren).RNase A ass déi aktivst bei der Spaltung vun eenzelstrengeg RNA.Recommandéiert Aarbechtskonzentratioun ass 1-100μG / ml, kompatibel mat verschiddene Reaktiounssystemer.Niddereg Salzkonzentratioun (0-100 mM NaCl) ka benotzt ginn fir eenzelstrengeg RNA, duebelstrengeg RNA, an RNA Ketten geformt duerch RNA-DNA Hybridiséierung ze schneiden.Wéi och ëmmer, bei héijer Salzkonzentratioun (≥0,3 M), RNase A spalt nëmme spezifesch eenzegstrengeg RNA.
RNase A gëtt meeschtens benotzt fir RNA während der Virbereedung vu Plasmid DNA oder genomesch DNA ze entfernen. Ob DNase während dem Virbereedungsprozess aktiv ass oder net, kann d'Reaktioun einfach beaflossen.Déi traditionell Method fir an engem Waasserbad ze kachen ka benotzt ginn fir d'DNase Aktivitéit ze inaktivéieren.Dëst Produkt enthält keng DNase a Protease, a brauch keng Hëtztbehandlung virum Gebrauch.Zousätzlech kann dëst Produkt och a molekulare Biologesch Experimenter wéi RNase Schutzanalyse an RNA Sequenzanalyse benotzt ginn.
Stockage Konditiounen
D'Produkt kann bei -25 ~ -15 ℃ gespäichert ginn, gëlteg fir 2 Joer.
Uweisungen
Dëst ass eng vun den allgemenge Methoden fir RNase A Späicherléisung virzebereeden.Et kann och virbereet ginn duerchaner Methoden no den traditionelle Methoden am Labo oder Referenzliteratur (wéi zdirekt opléisen an 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 oder Tris-NaCl Léisung)
1. Benotzt 10 mM Natriumacetat (pH 5.2) fir 10 mg / ml RNase A Späicherléisung ze preparéieren
2. Heizung bei 100 ℃ fir 15 min
3. Cool op Raumtemperatur, add 1/10 Volume vun 1 M Tris-HCl (pH 7,4), passt säin pH op 7,4 (firBeispill, 500 ml 10g/ml RNase Späicherléisung 1M Tris-HCL, PH7.4 derbäisetzen)
4. Ënnerverpackt bei -20 ℃ fir gefruerene Lagerung, déi bis zu 2 Joer stabil kënne sinn.
[Notiz]: Wann Dir RNaseA Léisung ënner neutrale Bedéngungen kachen, gëtt RNase Nidderschlag bilden;Kachen et bei engem nidderegen pH, a wann et Nidderschlag gëtt, kann et beobachtet ginn, wat duerch d'Präsenz vu Protein Gëftstoffer verursaacht ka ginn.Wann Sediment nom Kachen fonnt gëtt, kënnen Gëftstoffer duerch Héichgeschwindeg Zentrifugéierung (13000 RPM) geläscht ginn, an dann ënnergepackt fir d'Gefrierlagerung.
Produit Informatiounen
| Synonyme | Ribonuklease I;Bauchspaicheldrüs Ribonuklease;Ribonuklease 3'-pyrimidnooligonucleotidohydrolase;Ronn A;Endoribonulcease I |
| CAS Nr. | 9001-99-4 |
| Ausgesinn | Wäiss lyophiliséierte Pulver |
| Molekulare Gewiicht | ~ 13,7 kDa (Aminosaier Sequenz) |
| Ph Wäert | 7.6 (Aktivitéitsberäich 6-10) |
| Gëeegent Temperatur | 60 ℃ (Aktivitéitsberäich 15-70 ℃) |
| Aktivéieren Agent | Na2+.K+ |
| Inhibitor | Rnase Inhibitor |
| Inaktivéierungsmethod | Kann net duerch Heizung inaktivéiert ginn, et gëtt virgeschloen d'Zentrifugekolonn ze benotzen |
| Urspronk | Béi |
| Solubilitéit | Opléisbar am Waasser (10mg/ml) |
| Verloscht op dréchen | ≤5,0% |
| Enzym Aktivitéit | ≥60 Kunitz Eenheeten/mg |
| Isoelektresche Punkt | 9.6 |
Notizen
Fir Är Sécherheet a Gesondheet, gitt w.e.g. Labo-Mäntel an Wegwerfhandschuesch fir Operatioun.
