Universal SYBR GREEN qPCR Premix (Blue)
Cat No: HCB5041B
Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) ass eng Pre-Léisung fir 2× Echtzäit quantitativ PCR Verstäerkung, charakteriséiert duerch héich Sensibilitéit a Spezifizitéit, ass blo a Faarf, an huet den Effekt vun der Probe Additioun Tracing.De Kärkomponent Taq DNA Polymerase benotzt Antikörper Hot Start fir effektiv net-spezifesch Amplifikatioun ze hemmen wéinst der Primer-annealing wärend der Probepräparatioun.Zur selwechter Zäit füügt d'Formel d'Promotiounsfaktoren fir d'Verstäerkungseffizienz vun der PCR-Reaktioun ze verbesseren an d'Verstäerkung vun Genen mat verschiddene GC-Inhalter (30 ~ 70%) ausgläichen, sou datt quantitativ PCR eng gutt linear Relatioun an enger breeder quantitativer Verhältnis kritt. Regioun.Dëst Produkt enthält speziellen ROX Passive Reference Dye, deen op déi meescht qPCR Instrumenter applicabel ass.Et ass net néideg d'Konzentratioun vu ROX op verschidden Instrumenter unzepassen.Et ass nëmmen néideg Primer a Schablounen ze addéieren fir de Reaktiounssystem fir Amplifikatioun virzebereeden.
Komponenten
Universal Blue qPCR Master Mix
Stockage Konditiounen
D'Produkt gëtt mat Äispäck verschéckt a ka bei -25 ℃ ~ -15 ℃ fir 18 Méint gelagert ginn.Et ass noutwendeg fir staark Liichtbestrahlung ze vermeiden wann Dir de Reaktiounssystem späichert oder virbereet.
Spezifizéierung
| Konzentratioun | 2× |
| Detektiounsmethod | SYBR |
| PCR Method | qPCR |
| Polymerase | Taq DNA Polymerase |
| Typ vun Echantillon | DNA |
| Applikatioun Equipement | Déi meescht qPCR Instrumenter |
| Produit Typ | SYBR Premix fir Echtzäit Fluoreszenz quantitative PCR |
| Bewerbung op (Uwendung) | Gen Ausdrock |
Uweisungen
1.Reaktioun System
| Komponenten | Volome (μL) | Volome (μL) | Finale Konzentratioun |
| Universal SYBR GREEN qPCR Premix | 25 | 10 | 1× |
| Forward Primer (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0,2 mmol/l |
| Reverse Primer (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0,2 mmol/l |
| DNA | X | X | |
| ddH2O | bis 50 | bis 20 | - |
[Notiz]: Mix grëndlech virum Gebrauch fir exzessiv Bubbles vu kräftege Rüschen ze vermeiden.
a) Primer Konzentratioun: Déi lescht Primer Konzentratioun ass 0,2μmol / L, a kann och tëscht 0,1 an 1,0 μmol / L ugepasst ginn.
b) Schabloun Konzentratioun: Wann d'Schabloun onverdünnt cDNA Stammléisung ass, sollt de benotzte Volumen net méi wéi 1/10 vum Gesamtvolumen vun der qPCR Reaktioun sinn.
c) Schablounverdünnung: Et ass recommandéiert d'cDNA Stammléisung ëm 5-10 Mol ze verdënnen.Den optimale Betrag vun der Schabloun bäigefüügt ass besser wann de Ct-Wäert kritt duerch Verstäerkung 20-30 Zyklen ass.
d) Reaktiounssystem: Et ass recommandéiert 20μL oder 50μL ze benotzen fir d'Effizienz an d'Wiederhuelbarkeet vun der Zilgen-Amplifikatioun ze garantéieren.
e) Systempräparatioun: Preparéiert w.e.g. an der super propper Bänk a benotzt d'Spëtze an d'Reaktiounsröhren ouni Nukleasereschter;Et ass recommandéiert d'Spëtze mat Filterpatrounen ze benotzen.Vermeiden Kräizkontaminatioun an Aerosolkontaminatioun.
2.Reaktioun Programm
Standard Programm
| Cycle Schrëtt | Temp. | Zäit | Cyclen |
| Éischt Denaturatioun | 95 ℃ | 2 min | 1 |
| Denaturatioun | 95 ℃ | 10 sec | 40 |
| Annealing / Extensioun | 60 ℃ | 30 Sek.★ | |
| Schmelzkurve Etapp | Instrument Default | 1 | |
Schnell Programm
| Cycle Schrëtt | Temp. | Zäit | Cyclen |
| Éischt Denaturatioun | 95 ℃ | 30 sec | 1 |
| Denaturatioun | 95 ℃ | 3 sec | 40 |
| Annealing / Extensioun | 60 ℃ | 20 Sek.★ | |
| Schmelzkurve Etapp | Instrument Default | 1 | |
[Note]: De schnelle Programm ass gëeegent fir déi grouss Majoritéit vun Genen, a Standardprogrammer kënne fir eenzel komplex sekundär Strukturgenen probéiert ginn.
a) Annealing Temperatur an Zäit: Passt w.e.g. no der Längt vum Primer an Zilgen un.
b) Fluoreszenz Signal Acquisitioun (★): Setzt w.e.g. d'experimentell Prozedur no den Ufuerderungen an den Instruktioune fir d'Benotzung vum Instrument.
c) Schmelzkurve: Den Instrument Standardprogramm kann normalerweis benotzt ginn.
3. Resultat Analyse
E Minimum vun dräi biologesche Replikate ware fir quantitativ Experimenter erfuerderlech.No der Reaktioun muss d'Verstäerkungskurve an d'Schmelzkurve bestätegt ginn.
3.1 Amplifikatiounskurve:
D'Standard Amplifikatiounskurve ass S-förmlech.Quantitativ Analyse ass am meeschte korrekt wann de Ct Wäert tëscht 20 an 30 fällt. Wann de Ct Wäert manner wéi 10 ass, ass et néideg d'Schabloun ze verdënnen an den Test nach eng Kéier auszeféieren.Wann de Ct Wäert tëscht 30-35 ass, ass et néideg d'Schabloun Konzentratioun oder de Volume vum Reaktiounssystem ze erhéijen, fir d'Verstäerkungseffizienz ze verbesseren an d'Genauegkeet vun der Resultatanalyse ze garantéieren.Wann de Ct Wäert méi wéi 35 ass, kënnen d'Testresultater den Ausdrock vum Gen net quantitativ analyséieren, awer kënne fir qualitativ Analyse benotzt ginn.
3.2 Schmelzkurve:
Den eenzegen Héichpunkt vun der Schmelzkurve weist datt d'Reaktiounsspezifizitéit gutt ass a quantitativ Analyse ka gemaach ginn;wann d'Schmelzkurve duebel oder multiple Peaks weist, kann quantitativ Analyse net gemaach ginn.D'Schmelzkurve weist duebel Peaks, an et ass néideg ze beurteelen ob den net-Zil-Peak Primer-Dimer oder net-spezifesch Amplifikatioun duerch DNA Agarosegel Elektrophorese ass.Wann et e Primer Dimer ass, ass et recommandéiert d'Primer Konzentratioun ze reduzéieren oder Primer mat héijer Amplifikatiounseffizienz nei ze designen.Wann et net-spezifesch Amplifikatioun ass, erhéicht w.e.g. d'Annealungstemperatur oder nei designt d'Primer mat Spezifizitéit.
Notizen
Gitt w.e.g. déi néideg PPE, sou Labo Mantel an Handschuesch, fir Är Gesondheet a Sécherheet ze garantéieren!
Dëst Produkt ass NËMMEN fir Fuerschung benotzt!
