Robustart Taq DNA Polymerase
Robustart Taq DNA Polymerase ass eng Hot Start DNA Polymerase.Dëst Produkt kann net nëmmen déi net-spezifesch Reaktioun besser hemmen, verursaacht duerch net-spezifesch Annealing vu Primer oder Primer Aggregatioun am Prozess vun der PCR System Virbereedung an Amplifikatioun.Dofir huet et exzellent Spezifizitéit an ass méi effektiv fir d'Verstäerkung vu gerénger Konzentratioun Templates, an et ass gëeegent fir multiplexéiert PCR Amplifikatiounsreaktioun.Ausserdeem huet dëst Produkt ganz gutt Uwendbarkeet, a stabil Amplifikatiounsresultater kënnen a verschiddenen Aarte vu PCR Reaktiounen kritt ginn.
Komponenten
1.5 U/μL Robustart Taq DNA Polymerase
2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ fräi) (optional)
3.25 mM MgCl2(optional)
* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ fräi) enthält keng dNTP a Mg²+, füügt w.e.g. dNTPs a MgCl derbäi2wann Dir de Reaktiounssystem virbereet.
Recommandéiert Uwendungen
1.Schnell Verstäerkung.
2.Multiple Verstäerkung.
3.Direkt Verstäerkung vu Blutt, Swabs an aner Proben.
4.Atmungskrankheeten Detektioun.
Stockage Zoustand
-20°C fir laangfristeg Lagerung, sollt virum Gebrauch gutt gemëscht ginn, evitéiert heefeg Afréiere-Thaw.
*Wann Nidderschlag optrieden nom Frigoen, ass et normal;et ass recommandéiert op Raumtemperatur ze equilibréieren virum Vermëschung a Gebrauch.
Eenheet Definitioun
Eng aktiv Eenheet (U) ass definéiert wéi d'Quantitéit un Enzym deen 10 nmol vun Deoxyribonucleotid an sauer-onlöslecht Material bei 74 ° C fir 30mins mat aktivéierter Saumon Sperma DNA als Schabloun / Primer integréiert.
Qualitéitskontroll
1.SDS-PAGE elektrophoretesch Rengheet méi wéi 98%.
2.Amplifikatiounsempfindlechkeet, Batch-zu-Batch Kontroll, Stabilitéit.
3.Keng exogen Nuklease Aktivitéit, keng exogen Endonuklease oder Exonuklease Kontaminatioun
Uweisungen
Reaktioun Setup
Komponenten | Volumen (μL) | Finale Konzentratioun |
10 × PCR Buffer II (Mg²+ fräi)a | 5 | 1× |
dNTPs (10 mM all dNTP) | 1 | 200 μM |
25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 mM |
Robustart Taq DNA Polymerase (5U/μL) | 0,25-0,5 | 1,25-2,5 U |
25 × Primer Mixb | 2 | 1× |
Schabloun | - | < 1 μg/Reaktioun |
ddH2O | Zu 50 | - |
Notizen:
1) a.De Puffer enthält keng dNTP a Mg²+, füügt w.e.g. dNTPs a MgCl derbäi2wann Dir de Reaktiounssystem virbereet.
2) b.Wann benotzt fir qPCR / qRT-PCR, fluorescent Sonden sollen der Reaktioun System dobäi ginn.Normalerweis gëtt eng final Primer Konzentratioun vun 0,2 μM gutt Resultater;Wann d'Reaktiounsleistung schlecht ass, kann d'Primerkonzentratioun am Beräich vun 0,2-1 μM ugepasst ginn.D'Sondkonzentratioun gëtt normalerweis am Beräich vun 0,1-0,3 μM optimiséiert.Konzentratiounsgradientexperimenter kënne gemaach ginn fir déi bescht Kombinatioun vu Primer a Sonde ze fannen.
Thermal Cycling Protokoll
Regelméisseg PCRProzess | |||
Schrëtt | Temperatur | Zäit | Cyclen |
Pre-Denaturatioun | 95 ℃ | 1-5 Minutten | 1 |
Denaturatioun | 95 ℃ | 10-20 Sek | 40-50 |
Annealing / Erweiderung | 56-64 ℃ | 20-60 Sek |
Schnell PCRProzess | |||
Schrëtt | Temperatur | Zäit | Cyclen |
Pre-Denaturatioun | 95 ℃ | 30 sec | 1 |
Denaturatioun | 95 ℃ | 1-5 Sek | 40-45 |
Annealing / Erweiderung | 56-64 ℃ | 5-20 Sek |
Notizen
1.D'Verstäerkungsquote vu schnelle DNA Polymerase soll net manner wéi 1 kb / 10 s sinn.D'Temperaturerhéijung an d'Fallrate, d'Temperaturkontrollmodus an d'Wärmeleitungseffizienz vu verschiddene PCR-Instrumenter variéieren immens, sou datt et recommandéiert ass déi optimal Reaktiounsbedéngungen fir dat spezifescht séier PCR-Instrument ze optimiséieren.
2.De System ass héich adaptéierbar, mat méi héijer Spezifizitéit a Sensibilitéit.
3.Gëeegent fir als héich Empfindlechkeet PCR Detektiounsreagenz ze benotzen, a kënne a multiplex PCR Amplifikatiounsreaktiounen benotzt ginn.
4.5′→3′ Polymerase Aktivitéit, 5′→3′ Exonuklease Aktivitéit;keng 3′→5′ Exonuklease Aktivitéit;keng Korrekturfunktioun.
5.Gëeegent fir qualitativ a quantitativ Tester vu PCR an RT-PCR.
6.Den 3′ Enn vum PCR Produkt ass A, deen direkt an en T Vektor gekloon ka ginn.
7.Déi dräi-Schrëtt Method ass recommandéiert fir Primer mat niddereg annealing Temperaturen oder fir amplification vun Fragmenter méi wéi 200 bp.