DNase I (Rnase Free) (5u/ul)
Cat No: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) ass eng Endodeoxyribonuclease déi eenzel- oder duebelstrengend DNA verdaut kann.Et erkennt a spalt Phosphodiesterbindungen fir Monodeoxynukleotiden oder eenzel- oder duebelstrengeg Oligodeoxynukleotiden ze produzéieren mat Phosphatgruppen um 5'-Terminal an Hydroxyl um 3'-Terminal.D'Aktivitéit vun DNase I hänkt vun Ca2+a kann duerch divalent Metalione wéi Mn aktivéiert ginn2+an Zn2+.5 mM ca2+schützt den Enzym virun der Hydrolyse.A Präsenz vum Mg2+, konnt den Enzym zoufälleg all Site op all Strang vun DNA erkennen a spalten.A Präsenz vum Mn2+, kënnen déi duebel Stränge vun DNA gläichzäiteg unerkannt a gespléckt ginn op bal déiselwecht Plaz fir flaach Enn DNA Fragmenter oder klebrig Enn DNA Fragmenter mat 1-2 Nukleotiden ze bilden.
Komponenten
| Numm | 0.1 KU | 1 KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, RNase-gratis | 20 μL | 200 μL | 1ml vun | 10 ml |
| 10 × DNase ech Buffer | 1ml vun | 1ml vun | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Stockage Konditiounen
-25 ℃ ~ -15 ℃ fir Stockage;Transport ënner Äispäck.
Uweisungen
1. Bereet d'Reaktiounsléisung am RNase-fräien Röhre no de Proportiounen hei ënnen:
| Komponent | Volumen |
| RNA | X µg |
| 10 × DNase ech Buffer | 1 μl |
| DNase I, RNase-gratis (5U/μL) | 1 U pro µg RNA① |
| ddH2O | Bis zu 10 μL |
Bemierkung: ①Berechent de Volume vun DNase I dee muss bäigefüügt ginn baséiert op der Quantitéit vun der RNA.
2.37 ℃ fir 15 Minutten;
3. Fügt 0.5M EDTA op d'Finale Konzentratioun vun 2.5mM ~ 5mM, a waarm bei 65 ℃ fir 10 Minutten fir d'Reaktioun ze stoppen.D'Probe kann direkt fir déi nächst Reaktioun benotzt ginn wéi ëmgedréint Transkriptiounexperimentéieren.
Eenheet Definitioun
Eng Eenheet ass definéiert wéi d'Quantitéit un Enzym deen 1µg pBR322 komplett ofbautDNA an 10 Minutten bei 37 ℃.
Qualitéitskontroll
RNase:5U vun DNase I mat 1,6 µg MS2 RNA fir 4 Stonnen bei 37 ℃ gëtt keng Degradatioun wéibestëmmt duerch Agarosegel Elektrophorese.
Notizen
1. Weg bereet 0.5MEDTA selwer.
2. Benotzt 1U DNase I pro µg RNA.Wéi och ëmmer, wann d'RNA manner wéi 1µg ass, benotzt w.e.g. 1U DNase I.
3. Gitt w.e.g. den Enzym op Äis während der Operatioun.
