Superstart qPCR Premix plus-UNG
Cat No: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG ass e spezialiséierte Reagens entworf fir Echtzäit PCR qualitativ a quantitativ Reaktiounen mat Sonde-baséiert Detektioun, speziell fir Lyophiliséierungsprozesser entwéckelt.Et enthält en neien Hotstart-Enzym Hotstart Taq plus (DG), deen seng Taq-Enzymaktivitéit bei Raumtemperatur versiegelt huet, effektiv net-spezifesch Amplifikatioun hemmt verursaacht duerch Primer net-spezifesch Annealing oder Primer-Dimerbildung ënner nidderegen Temperaturbedéngungen, an doduerch verbessert. d'Spezifizitéit vun der Amplifikatiounsreaktioun.Dëse Reagens benotzt en optimiséierte qPCR spezifesche Puffer an UNG / dUTP Anti-Kontaminatiounssystem fir séier Hot-Start z'erreechen, d'Effizienz an d'Sensibilitéit vun de qPCR Reaktiounen staark ze verbesseren.Et kann gutt Standardkurven an enger breeder Palette vu Quantitatiounsberäicher kréien a präzis Quantitatioun ausféieren, effektiv falsch positiv Verstäerkung verhënnert, déi duerch Reschter PCR Produkter oder Aerosolkontaminatioun verursaacht gëtt.Dëse Reagens ass kompatibel mat de meeschte fluoreszent quantitativen PCR-Instrumenter vu Hiersteller wéi Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad a Roche etc., a weist gutt Stabilitéit a lyophiliséierter Form.
Reagens Zesummesetzung
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+gratis) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4 × lyoprotectant (optional)
Stockage Konditiounen
laangfristeg Lagerung bei -20 ℃;kann bei 4 ℃ bis zu 3 Méint gespäichert ginn.Mix gutt virum Gebrauch anevitéieren widderholl Afréiere an thawing.
Cycling Protokoll
| Prozedur | Temp. | Zäit | Zyklus |
| Verdauung | 50 ℃ | 2 min | 1 |
| Polymerase Aktivatioun | 95 ℃ | 1 ~ 5 min | 1 |
| Denature | 95 ℃ | 10-20 s | 40-50 |
| Annealing an Extensioun | 56 ~ 64 ℃ | 20-60 s | 40-50 |
qPCR Liquid Reaktioun SyStamm Virbereedung
|
Zesummesetzung |
25 µL Volumen |
50 µL Volumen |
Finale Konzentratioun |
| 5× HotstartPremix plus-UNG(Mg2+gratis) (DG) | 5 µl | 10 µl | 1× |
| 250 mM MgCl2 | 0,45 µl | 0,9 µl | 4,5 mm |
| 4 × lyoprotectant1 | 6,25 l | 12,5 µl | 1× |
| 25 × Primer-Sonde Mix2 | 1 µl | 2 µl | 1× |
| Schabloun DNA3 | --- | --- | --- |
| ddH2O | bis 25 µl | bis 50 µl | --- |
1. Eng final Konzentratioun vun 0.2μM fir Primer gëtt normalerweis gutt Resultater;wann d'Reaktioun Leeschtung schlecht ass, ajustéieren Primer Konzentratioun am Beräich vun 0,2-1μM wéi néideg.Sondekonzentratioun gëtt typesch am Beräich vun 0.1-0.3μM duerch Gradientexperimenter optimiséiert fir optimal Kombinatiounen ze fannen.
2. D'Kopie Zuel vun Zil Genen enthale an verschidden Zorte vu Schablounen variéiert;wann néideg, kann d'Gradientverdünnung duerchgefouert ginn fir den optimale Template Additiounsbetrag ze bestëmmen.
3. Dëse System kann lyophiliséiert ginn;wann Clienten dëse System ouni Gefrier-Trocknung Ufuerderunge benotzen, 4 × lyoprotectant kann selektiv dobäi ginn; wann et gefruer-gedréchent Produiten néideg sinn, während flësseg reagents Etapp Produit Leeschtung Validatioun, muss et 4 × lyoprotectant dobäi Konsequenz mat der lyophilized System Komponente ze garantéieren an Effekter.
Wann de System benotzt gëttd fir Afréiere-Trocknung, preparéieren der System as folgend:
| Zesummesetzung | 25µL Reaktioun System |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+gratis) (DG) | 5 µl |
| 250 mM MgCl2 | 0,45 µl |
| 4 × lyoprotectant | 6,25 l |
| 25 × Primer-Sonde Mix | 1 µl |
| ddH2O | Zu 18-20 µL |
* Wann aner Systemer fir Gefriertrocknung gebraucht ginn, konsultéiert w.e.g. separat.
Lyophilization Prozedurss
| Prozedur | Temp. | Zäit | Zoustand | Drock |
| Pre-Afréiere | 4℃ | 30 min | Halt |
1 atm |
| -50 ℃ | 60 min | Ofkillung | ||
| -50 ℃ | 180 min | Halt | ||
| Primär Trocknung | -30 ℃ | 60 min | Heizung |
Ultimate Vakuum |
| -30 ℃ | 70 min | Halt | ||
| Sekundär Trocknung | 25 ℃ | 60 min | Heizung |
Ultimate Vakuum |
| 25 ℃ | 300 min | Halt |
2. Den uewe genannte Lyophiliséierungsprozess ass nëmme fir Referenz.Verschidde Produktarten a verschidde Gefriertrockner hu verschidde Parameteren, sou datt Upassunge kënnen no aktuell gemaach ginnKonditioune beim Gebrauch.
3. Verschidde lyophilization Prozesser kënne gëeegent sinn fir verschidde Batch Gréissten vun lyophilizedProdukter, sou datt genuch Testvalidatioun muss gemaach ginn wann se fir grouss Produktioun benotzt ginn.
Instruktioune fir lyophilize ze benotzend puder
1. Kuerz Zentrifuge vum lyophiliséierte Pulver;
2. Füügt Nukleinsäure Schabloun op de lyophiliséierte Pulver a füügt Waasser bis zu 25μL;
3. Mix gutt duerch Zentrifugéierung a lafen op Maschinn.
Qualitéitskontroll:
1. Funktionell Tester: Sensibilitéit, Spezifizitéit, Reproduktioun vu qPCR.
2. Keng exogen Nuklease Aktivitéit, keng exogen Endo / Exonuklease Kontaminatioun.
Technesch Informatioun:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG benotzt e Roman Hot-Start Enzym, deen e schnelle Hot-Start bannent 1 ~ 5 Minutten erméiglecht;duerch speziell Pufferformuléierung ass et gëeegent fir multiplex fluoreszent quantitativ PCR Reaktiounen.
2. Et huet méi héich Spezifizitéit, déi d'Sensibilitéit vun der Fluoreszenz quantitativer PCR Limit Detektioun wesentlech verbessert, d'Verstäerkungskurven Normaliséierung ze maachen, d'Fluoreszenzwäerter offensichtlech Verbesserung bei gerénger Konzentratiounsschablounen ze kréien, gëeegent als héich Empfindlechkeet Fluoreszenz quantitativ PCR Detektiounsreagenz.
3. Fir Primer mat enger niddereger Glühungstemperatur oder méi wéi 200bp Fragmenter, gëtt 3-Schrëtt Method recommandéiert.
4. D'Utilisatiounseffizienz vun dUTP an d'Sensibilitéit fir UNG Enzym ënnerscheede sech fir verschidden Zilgenen, also wann d'UNG-System zu enger Ofsenkung vun der Detektiounsempfindlechkeet féiert, sollt de Reaktiounssystem ugepasst an optimiséiert ginn.Wann technesch Ënnerstëtzung néideg ass, kontaktéiert eis Firma.
5. Benotzt speziell Gebidder a Pipette virun an no der Verstäerkung, droen Handschuesch während der Operatioun an ersetzen se dacks;Maacht d'Reaktiounsröhre net no der PCR Fäerdegstellung op fir Kontaminatioun vu Proben duerch PCR Produkter ze minimiséieren.
