Maus Genotyping Kit
Cat No: HCR2021A
Dëst Produkt ass e Kit entworf fir d'rapid Identifikatioun vu Mausgenotypen, dorënner DNA rau Extraktioun a PCR Amplifikatioun System.D'Produkt kann fir PCR Amplifikatioun direkt vum Mausschwanz, Ouer, Zeh an aner Stoffer benotzt ginn no einfache Spaltung duerch Lysis Buffer a Proteinase k.Keng Iwwernuechtung Verdauung, Phenol-Chloroform Extraktioun oder Kolonnreinigung, wat einfach ass an d'Zäit opwänneg vun Experimenter verkierzt.D'Produkt ass gëeegent fir Amplifikatioun vun Zilfragmenter bis zu 2kb a multiplex PCR Reaktioune mat bis zu 3 Pairen Primer.Den 2 × Maus Tissue Direct PCR Mix enthält genetesch manipuléiert DNA Polymerase, Mg2+, dNTPs an en optimiséierte Puffersystem fir eng héich Amplifikatiounseffizienz an Inhibitor Toleranz ze bidden, sou datt PCR Reaktiounen duerchgefouert kënne ginn andeems Schablounen a Primer addéieren an d'Produkt op 1 × rehydréieren.De PCR Produkt dat mat dësem Produkt verstäerkt ass huet eng prominent "A" Basis um 3′ Enn a kann direkt fir TA Klonen no der Reinigung benotzt ginn.
Komponenten
| Komponent | Gréisst |
| 2 × Maus Tissue Direct PCR Mix | 5 × 1,0 ml |
| Lysis Buffer | 2 × 20 ml |
| Proteinase K | 800 l |
Stockage Konditiounen
Produkter solle bei -25 ~ -15 ℃ fir 2 Joer gelagert ginn.Nom Ofdeckung kann Lysis Buffer bei 2 ~ 8 ℃ fir kuerzfristeg Multiple Benotzung gespäichert ginn, a gutt vermëschen wann Dir benotzt.
Applikatioun
Dëst Produkt ass gëeegent fir Maus Knockout Analyse, transgen Detektioun, Genotyping a sou weider.
Eegeschaften
1.Einfach Operatioun: kee Besoin fir genomesch DNA ze extrahieren;
2.Breet Uwendung: gëeegent fir direkt Verstäerkung vu verschiddene Mausgewebe.
Uweisungen
1.Verëffentlechung vun genomesch DNA
1) Virbereedung vun lysate
Tissuelysat gëtt no der Unzuel vun de Mausproben virbereet fir ze lyséieren (Tissuelysat soll op der Plaz no der Doséierung virbereet ginn a grëndlech gemëscht ginn fir ze benotzen), an den Undeel vun de Reagenzen déi fir eng eenzeg Probe erfuerderlech sinn ass wéi follegt:
| Komponenten | Volumen (μL) |
| Proteinase K | 4 |
| Lysis Buffer | 200 |
2) Probe Virbereedung a Lysis
Recommandéiert Tissue Gebrauch
| Typ vunTissue | Recommandéiert Volumen |
| Mausschwanz | 1-3 mm |
| Maus Ouer | 2-5 mm |
| Maus Zeh | 1-2 Stéck |
Huelt eng entspriechend Quantitéit vun Maus Tissue Echantillon an propper Zentrifuge Réier, füügt 200μL frëscht Tissuelysat an all Zentrifugeröhre, vortex a schütt, dann inkubéiert bei 55 ℃ fir 30mins, an hëtzt dann bei 98 ℃ fir 3mins.
3) Zentrifusioun
Schütt d'Lysat gutt a centrifugéiert bei 12.000 RPM fir 5mins.De Supernatant kann als Schabloun fir PCR Amplifikatioun benotzt ginn.Wann d'Schabloun fir d'Späichere gebraucht gëtt, transferéiert de Supernatant an en anert steril Zentrifugeröhre a späichert bei -20 ℃ fir 2 Wochen.
2.PCR Amplifikatioun
Ewechzehuelen der 2 × Maus Tissue Direct PCR Mix vun -20 ℃ an thaw op Äis, Mëschung upside down a preparéieren de PCR Reaktioun System no der folgender Tabell (operéieren op Äis):
| Komponenten | 25μLSystem | 50μLSystem | Finale Konzentratioun |
| 2 × Maus Tissue Direct PCR Mix | 12,5 μL | 25 μl | 1× |
| Primer 1 (10μM) | 1,0 μL | 2,0 μL | 0,4 μM |
| Primer 2 (10μM) | 1,0 μL | 2,0 μL | 0,4 μM |
| Spaltprodukta | Wéi néideg | Wéi néideg |
|
| ddH2O | Bis zu 25 μL | Bis zu 50 μL |
|
Notiz:
a) De Betrag addéiert däerf net méi wéi 1/10 vum System sinn, a wann ze vill bäigefüügt gëtt, kann PCR Verstäerkung hemmt ginn.
Recommandéiert PCR Konditiounen
| Cycle Schrëtt | Temp. | Zäit | Cyclen |
| Éischt Denaturatioun | 94 ℃ | 5 min | 1 |
| Denaturatioun | 94 ℃ | 30 sec | 35-40 |
| Annealinga | Tm+3~5℃ | 30 sec | |
| Erweiderung | 72℃ | 30 sec/kb | |
| Finale Verlängerung | 72℃ | 5 min | 1 |
| - | 4℃ | Halt | - |
Notiz:
a) Annealing Temperatur: Mat Referenz op den Tm Wäert vum Primer, ass et recommandéiert d'annealing Temperatur op de méi klengen Tm Wäert vum Primer +3 ~ 5 ℃ ze setzen.
Gemeinsam Problemer a Léisungen
1.Keng geziilte Sträifen
1) Exzessiv Lysisprodukt.Wielt de passenden Betrag vun der Schabloun, normalerweis net méi wéi 1/10 vum System;
2) Ze grouss Prouf Gréisst.Verdünnt de Lysat 10 Mol a verstäerkt dann, oder reduzéiert d'Probegréisst an d'Re-Lys;
3) Tissue Echantillon sinn net frësch.Et ass recommandéiert frësch Tissueproben ze benotzen;
4) Schlecht Primer Qualitéit.Benotzt genomesch DNA fir Amplifikatioun fir d'Primerqualitéit z'iwwerpréiwen an de Primer Design ze optimiséieren.
2.Net spezifesch Amplifikatioun
1) D'annealing Temperatur ass ze niddreg an der Zyklus Zuel ass ze héich.Erhéijung vun der annealing Temperatur a reduzéieren d'Zuel vun Zyklen;
2) Schabloun Konzentratioun ass ze héich.Reduzéiert d'Quantitéit vun der Schabloun oder verdënnt d'Schabloun 10 Mol no der Amplifikatioun;
3) Schlecht Primer Spezifizitéit.Optimiséiert de Primer Design.
Notizen
1.Fir Kräizkontaminatioun tëscht Proben ze vermeiden, sollte verschidde Probeinstrumenter virbereet ginn, an d'Uewerfläch vun den Tools ka mat 2% Natriumhypochlorit-Léisung oder Nukleinsäurereiniger no all Probe gebotzt ginn, wann widderholl Benotzung erfuerderlech ass.
2.Et ass recommandéiert frësch Mausgewebe ze benotzen, an de Probevolumen sollt net ze grouss sinn fir d'Verstäerkungsresultater ze vermeiden.
3.Lysis Buffer soll heefeg Afréiere-Thaw vermeiden, a ka bei 2 ~ 8 ℃ fir kuerzfristeg Multiple Notzung gelagert ginn.Wann bei niddreger Temperatur gelagert gëtt, kann Nidderschlag optrieden, a muss virum Gebrauch komplett opgeléist ginn.
4.PCR Mix soll heefeg Afréiere-Thaw vermeiden, a ka bei 4 ℃ fir kuerzfristeg widderholl Benotzung gelagert ginn.
5.Dëst Produkt ass nëmme fir wëssenschaftlech experimentell Fuerschung a soll net an der klinescher Diagnostik oder Behandlung benotzt ginn.
