Multiplex qPCR Sonde Premix
Cat No: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) ass eng Pre-Léisung fir 2 × Echtzäit quantitativ PCR Amplifikatioun charakteriséiert duerch héich Sensibilitéit a Spezifizitéit, déi blo a Faarf ass, an huet den Effekt vun der Probeadditioun.Dëst Produkt ass en 2 × Mix pre-gemëschte Reagens deen bis zu véier fluoreszent quantitativ PCR Reaktiounen an enger eenzeger Reaktiounswell erméiglecht.Dëst Produkt enthält déi genetesch modifizéiert Antikörpermethod fir den Taq Enzym waarm ze starten, wat d'Verstäerkungsempfindlechkeet a Spezifizitéit staark verbessert.Zur selwechter Zäit huet dëst Produkt de Multi-Reaktiounsbuffer déif optimiséiert, wat d'Verstäerkungseffizienz vun der Reaktioun verbesseren kann an déi effektiv Verstäerkung vu Low-Concentration Templates förderen.Dëst Produkt kann fir Genotyping a multiplex quantitativ Analyse benotzt ginn.
Spezifizéierung
| Hot Start | Built-in Hot Start |
| Detektiounsmethod | Primer-Sonde Detektioun |
| PCR Method | qPCR |
| Polymerase | Taq DNA Polymerase |
| Typ vun Echantillon | DNA |
Stockage Konditiounen
D'Produkt gëtt mat trockenem Äis verschéckt a ka bei -25 ~ -15 ℃ fir 2 Joer gelagert ginn.
Uweisungen
1. ReaktiounSystem
| Komponenten | Volumen (μL) | Finale Konzentratioun |
| 2× TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Primermix (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/L |
| Sondemix (10 μmol/L)b | × | 50-250 nmol/L |
| Rox Referenz Faarf | 0,5 | 1× |
| Schabloun DNA / cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | bis 25 | - |
Notizen:Virum Gebrauch grëndlech mëschen fir exzessiv Blasen duerch kräfteg Schüttelen ze vermeiden.
a.Primer Konzentratioun: Primer Mix enthält verschidde Pairen vu Primer, normalerweis all Primer bei enger Finale Konzentratioun vun 0,2 μmol/L a kann och tëscht 0,1 an 0,5 μmol/L ugepasst ginn.
b.Sonde Konzentratioun: Probe Mix enthält verschidde Sonden mat verschiddene Fluoreszenz Signaler, an d'Konzentratioun vun all Sonde kann tëscht 50 an 250 nmol / L no spezifesch Situatioun ugepasst ginn.
1.Rox Dye Referenz: Et gëtt op Echtzäit PCR Verstäerkungsinstrument wéi Applied Biosystems benotzt fir de Feeler vum Fluoreszenzsignal ze korrigéieren, deen tëscht Wellen generéiert gëtt;dëst Produkt enthält keng Rox Dye Referenz.Cas # 10200 ass recommandéiert wann néideg.
2.Schabloun Verdünnung: qPCR ass héich sensibel, an et ass recommandéiert d'Schabloun ze verdënnen fir ze benotzen.Wann d'Schabloun eng cDNA Stammléisung ass, däerf de Schablounvolumen net méi wéi 1/10 vum Gesamtvolumen sinn.
3.Reaktiounssystem: 25μL, 30μL oder 50 μL ass recommandéiert fir d'Effizienz an d'Wiederholbarkeet vun der Zilgen-Amplifikatioun ze garantéieren.
4.System Virbereedung: W.e.g. virbereeden an der super propper Bänk, a benotzt d'Spëtze a Reaktiounsröhre ouni Nukleasereschter;Et ass recommandéiert d'Spëtze mat Filterpatrounen ze benotzen.Vermeiden Kräizkontaminatioun an Aerosolkontaminatioun.
2.Reaktioun Programm
| Cycle Schrëtt | Temp. | Zäit | Cyclen |
| Éischt Denaturatioun | 95 ℃ | 5 min | 1 |
| Denaturatioun | 95 ℃ | 15 sec | 45 |
| Annealing / Extensioun | 60 ℃ | 30 sec |
Notizen:
1.Annealing / Extensioun: D'Temperatur an d'Zäit kënne passend ugepasst ginn no dem designéierte Primer Tm Wäert.
2.Fluoreszenz Signal Acquisitioun: D'Fluoreszenz Signal Acquisitioun Zäit erfuerderlech fir verschidde qPCR Detektiounsinstrumenter ass anescht, w.e.g. setzen no der Mindestzäitlimit.D'Zäit vu verschiddene gemeinsamen Instrumenter ass wéi follegt festgeluegt:
20 Sekonnen: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sec: Applied Biosystems 7300
32 sec: Applied Biosystems 7500
Notizen
Gitt w.e.g. déi néideg PPE, sou Labo Mantel an Handschuesch, fir Är Gesondheet a Sécherheet ze garantéieren!
