Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Cat No: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) ass e multiplex quantitative PCR Kit baséiert op RNA als Schabloun.Am Prozess vum Experiment goufen ëmgedréint Transkriptioun a quantitativ PCR am selwechte Rouer duerchgefouert, wat d'experimentell Operatioun vereinfacht an de Risiko vu Kontaminatioun reduzéiert huet.An dësem Kit gouf den éischte Strang cDNA effizient synthetiséiert duerch Hëtztbeständeg Reverse Transcriptase a quantitativ amplifizéiert duerch HotStart Tag DNA Polymerase.De Kit enthält haaptsächlech optimiséiert MP Puffer, Enzymen Mix, etc.. D'Puffer Léisung enthält schonn Mg2+an dNTP.Zousätzlech ginn d'Faktoren bäigefüügt, déi effektiv déi net-spezifesch PCR-Verstäerkung hemmen kënnen an d'Verstäerkungseffizienz vu multiple qPCR-Reaktiounen verbesseren, wat d'Verstäerkungseffizienz garantéieren kann a bis zu multiple Amplifikatiounsreaktioun ausféieren.Den dUTP / UDG System gouf bäigefüügt fir effektiv de Risiko vun der Aerosolkontaminatioun ze vermeiden.
Komponenten
1. Buffer
2. Enzym Mix
Spezifizéierung
| Hot Start | Built-in Hot Start |
| Detektiounsmethod | Primer-Sonde Detektioun |
| PCR Method | Ee Schrëtt RT-qPCR |
| Polymerase | Taq DNA Polymerase |
| Typ vun Echantillon | DNA |
Stockage Konditiounen
D'Produkt gëtt mat trockenem Äis verschéckt a ka bei -25 ~ -15 ℃ fir 1 Joer gelagert ginn.Et sollt dacks vermeidenafréieren-thaw.Et ass recommandéiert separat ze späicheren.
Uweisungen
1.Reaktioun System
| Komponenten | Volumen (μL) | Finale Konzentratioun |
| 2 × MP Buffer | 12.5 | 1× |
| Enzym Mix | 1 | - |
| Primer/Sondemix (2,5 μM) | 3 | 0,3 μM |
| Schabloun RNA | 1-10 | - |
| RNase Fräi H2O | zu 25 | - |
Notizen:
Vergewëssert Iech gutt virum Gebrauch ze mëschen, vermeit exzessiv Blasen verursaacht duerch gewaltsam Vibrationen.
a.Primer Konzentratioun: Primer Mëschung abegraff Multiplex Primer, ofhängeg vun der Situatioun optimal Primer Konzentratioun vläicht tëscht 0.l an 1.0μM.
b.Sonde Konzentratioun: Sonde Mëschung abegraff Multiplex Sonde Label Differenz fluorescent Grupp, ofhängeg vun der Situatioun optimal Sonde Konzentratioun vläicht tëscht 0,05 an 0,5μM.
c.Schabloun Verdünnung: qPCR ass héich sensibel an et ass recommandéiert d'Schabloun ze verdënnen.De Kontroll Ct Wäert ass gëeegent tëscht 20 an 35.
d.System Virbereedung: W.e.g. virbereeden an der ultra propper Aarbechtsdësch, a Pipetteur a Reaktiounsröhre ouni Nukleasereschter;et ass recommandéiert de Pistoul Kapp mat Filter Element ze benotzen.Vermeiden Kräizkontaminatioun an Aerosolkontaminatioun.
2. Optimiséiert CyclingProtokoll
| Zyklus Schrëtt | Temp. | Zäit | Cyclen |
| Reverse Transkriptioun | 50 ℃a | 20 Minutten | 1 |
| Éischt Denaturatioun | 95 ℃ | 5 min | 1 |
| Amplifikatioun Reaktioun | 95 ℃ | 15 sec |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30 sec c |
Notizen:
a.Ëmgedréint Transkriptioun: D'Temperatur kann 42 ° C oder 50 ° C wielen.
b.Amplifikatiounsreaktioun: D'Temperatur gëtt no dem Tm-Wäert vun den entworfene Primer ugepasst.
c.Fluoreszenz Signal Acquisitioun: Setzt w.e.g. d'experimentell Prozedur no den Ufuerderunge vum Instrumenthandbuch.
Notizen
Gitt w.e.g. déi néideg PPE, wéi Labo Mantel a Handschuesch, fir Är Gesondheet a Sécherheet ze garantéieren.
