2 × Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
Cat No: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) ass entwéckelt fir PCR direkt vu Proben auszeféieren ouni DNA Extraktioun oder Probe Virbereedung.Dëse Reagens besteet aus Hot-Start DNA Polymerase, uracil DNA Glycosylase (UNG), RNase Inhibitor, MgCl2, dNTPs (mat dUTP anstatt dTTP), a Stabilisatoren, fir quantitativ PCR (qPCR).Dëse Reagens preformt eng héich Inhibitor-Toleranz, an dofir kann et direkt op d'Detektioun vu Proben applizéiert ginn wéi Halswäsch, Spaut, anti-koaguléiert ganz Blutt, Plasma, a Serum ouni DNA Extraktioun.De Reagens benotzt propriétaire Puffer fir qPCR mat gemëschten Enzyme vun anti-inhibitoreschen DNA Polymerase an UNG Enzym.Dofir kann et eng gutt Amplifikatioun vun Zilgenen a Proben kréien, déi Inhibitoren enthalen a falsch positiv Amplifikatioun hemmen, verursaacht duerch PCR Reschter an Aerosolverschmotzung.Dëse Reagens ass kompatibel mat de meeschte fluoreszent quantitative PCR Instrumenter, wéi Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche an sou weider.
Komponenten
1. 50 × SensiDirect Enzym / UNG Mix
2. 2× SensiDirect Premix Buffer (dUTP)
Stockage Konditiounen
All Komponente solle bei -20 ℃ fir laangfristeg Lagerung a 4 ℃ fir bis zu 3 Méint gehal ginn.Maacht w.e.g. grëndlech nom Ofdeckung a centrifugéiert virum Gebrauch.Vermeiden heefeg Afréiere-Thaw.
Cycling Protokoll
| Schrëtt | Temperatur | Zäit | Zyklus |
| Verdauung | 50 ℃ | 2 min | 1 |
| Polymerase Aktivatioun | 95 ℃ | 1-5 min | 1 |
| Denature | 95 ℃ | 10-20 Uhr | 40-50 |
| Annealing / Extensioun | 56-64 ℃ | 20-60s |
Pipetting Instruktioune
| Reagens | Volume pro Reaktioun | Volume pro Reaktioun | Finale Konzentratioun |
| 2 × SensiDirect Premix Buffer (dUTP) | 12,5 µl | 25 µl | 1× |
| 50 × SensiDirect Enzym/UNG Mix | 0,5 µl | 1 µl | 1× |
| 25 × Primer-Sonde Mix1, 2 | 1 µl | 2 µl | 1× |
| Prouf3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| Gesamtvolumen | 25 μl | 50 μl | - |
1. D'endgülteg Konzentratioun vu Primer ass normalerweis 0,2μM.Fir besser Resultater kann d'Primer Konzentratioun am Beräich vun 0,2-1μM optimiséiert ginn.
2. Allgemeng kann d'Sondekonzentratioun am Beräich vun 0,1-0,3μM optimiséiert ginn.Déi optimal Konzentratioun vun der Sonde ass mat dem Echtzäit PCR Amplifikatiounsinstrument, der Aart vun der Sonde, an der Aart vun der fluoreszenter Etikettéierungssubstanz verbonnen.Kuckt w.e.g. d'Instrumenthandbuch oder d'spezifesch Ufuerderunge vun all Leuchtstoffsonde.
3. Verschidden Zorte vu Echantillon enthalen verschidden Zorte an Inhalt vun inhibitor an Kopie Zuel vun Zil- Gen.De Probevolumen soll no aktuellen Zoustand berücksichtegt ginn.Maacht eng Verdünnung vun der Probe andeems Dir nukleasefräi Waasser oder TE Buffer bäidréit, wann néideg.
4. Recommandéiert Volumen vu verschiddene Proben:
| Prouf | Volumen fir een 50 μL Reaktioun | Maximum Verhältnis |
| Antikoaguléiert ganz Blutt | 2,5 μL | 5% |
| Plasma | 15 μl | 30% |
| Serum | 10 μL | 20% |
| Halswäschen | 10 μL | 20% |
| Spaut | 10 μL | 20% |
Qualitéitskontroll
1. Funktiounserkennung: Sensibilitéit, Spezifizitéit an Widderhuelbarkeet vu qPCR.
2. Keng exogen Nukleaseaktivitéit: keng exogen Endonuklease an Exonuklease Verschmotzung.
Notizen vum Produkt
1. Dëst Produkt beschäftegt eng nei Aart vun Hot-Start DNA Polymerase, déi an 1-5 Minuten ageschalt ka ginn. Well seng Reaktiounsbuffer optimiséiert gouf, ass et méi gëeegent fir duebel oder multiple Fluoreszenz quantitativ PCR mat Sondemethod.
2. Wann de Rn-Wäert vun der PCR-Verstäerkung ze niddreg ass oder d'Verstäerkung offensichtlech verhënnert ass, kann d'Probebetrag erofgoen, d'Erhéijung vum Reaktiounsvolumen oder d'virdrun Verdünnung vun der Probe d'Resultater verbesseren.
3. D'Sammlung vu Blutt, Spaut, Urin, Hals-Swab, asw.
4. Zënter verschidden Amplikonen hunn ënnerschiddlech Benotzungseffizienz fir dUTP a Sensibilitéit fir UNG, sollten d'Reagenz optimiséiert ginn wann d'Detektiounsempfindlechkeet erof geet wann Dir UNG System benotzt.Weg Kontakt eis fir technesch Ënnerstëtzung wann néideg.
5. Fir Verstäerkung vun Iwwerdroung PCR Produkter tëscht One-Schrëtt Reaktiounen ze vermeiden, sinn engagéierten experimentell Beräich a Pipette fir Amplifikatioun erfuerderlech.Operéiert mat Handschuesch a ännert dacks a maach d'Reaktiounsröhre net no der PCR Verstärkung op.
