Ronn A
Ribonuclease A (RNaseA) ass en eenzegstrengeg Polypeptid dat 4 Disulfidbindunge mat engem Molekulargewiicht vun ongeféier 13,7 kDa enthält.RNase A ass eng Endoribonuklease déi spezifesch Single-stranded RNA bei C an U Reschter degradéiert.Spezifesch erkennt d'Spaltung d'Phosphodiesterbindung geformt duerch d'5'-Ribose vun engem Nukleotid an der Phosphatgrupp op der 3'-Ribose vum ugrenzend Pyrimidin-Nukleotid, sou datt d'2,3'-Cyclesch Phosphate zu de entspriechende 3 hydrolyséiert ginn. 'Nukleosidphosphate (zB pG-pG-pC-pA-pG gëtt vun RNase A gespléckt fir pG-pG-pCp an A-PG ze generéieren).RNase A ass déi aktivst bei der Spaltung vun eenzelstrengeg RNA.Recommandéiert Aarbechtskonzentratioun ass 1-100 μ G / ml, kompatibel mat verschiddene Reaktiounssystemer.Niddereg Salzkonzentratioun (0-100 mM NaCl) ka benotzt ginn fir eenzelstrengeg RNA, duebelstrengeg RNA, an RNA Ketten geformt duerch RNA-DNA Hybridiséierung ze schneiden.
Wéi och ëmmer, bei héijer Salzkonzentratioun (≥0,3 M), spalt RNase A nëmme spezifesch eenzegstrengeg RNA.
RNase A gëtt meeschtens benotzt fir RNA ze läschen wärend der Virbereedung vu Plasmid DNA oder genomesch DNA.Ob DNase während dem Virbereedungsprozess aktiv ass oder net, kann d'Reaktioun einfach beaflossen.Déi traditionell Method fir an engem Waasserbad ze kachen ka benotzt ginn fir d'DNase Aktivitéit ze inaktivéieren.Dëst Produkt enthält keng DNase a Protease, a brauch keng Hëtztbehandlung virum Gebrauch.Zousätzlech kann dëst Produkt och a molekulare Biologie Experimenter wéi RNase Schutzanalyse an RNA Sequenzanalyse benotzt ginn.
Stockage Konditiounen
D'Produkt soll bei -25 ℃ ~ - 15 ℃ fir 2 Joer gelagert ginn.
Spezifikatioune
Ausgesinn | Pudder |
Quantitéit | 100 mg / 1 g |
Produit Typ | RNase A |
Uweisungen
Dëst ass eng vun den allgemenge Methoden fir RNase A Späicherléisung virzebereeden.Et kann och virbereet ginnduerch aner Methoden no den traditionelle Methoden am Laboratoire oder Referenzliteratur (wéi zdirekt opléisen an 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 oder Tris-NaCl Léisung)
1. Benotzt 10 mM Natriumacetat (pH 5,2) fir 10 mg / ml vun RNase A Späicherléisung ze preparéieren.
2. Heizung bei 100 ℃ fir 15 min.
3. Cool op Raumtemperatur, add 1/10 Volume vun 1 M Tris-HCl (pH 7,4), passt säin pH op 7,4 (firzum Beispill, 500 ml vun 10 mg / ml RNase Stockage Léisung 1 M Tris-HCl, pH7,4 derbäi).
4. Ënnerverpackt bei -20 ℃ fir gefruer Lagerung, déi bis zu 2 Joer stabil ka sinn.
[Notiz]:
Wann d'RNaseA Léisung ënner neutrale Bedéngungen kachen, gëtt RNase Nidderschlag bilden;Kachen et bei engem nidderegen pH, a wann et Nidderschlag gëtt, kann et beobachtet ginn, wat duerch d'Präsenz vu Protein Gëftstoffer verursaacht ka ginn.Wann Sediment nom Kachen fonnt gëtt, kënnen Gëftstoffer duerch Héich-Vitesse Zentrifugéierung (13000rpm) geläscht ginn, an dann ënnergepackt fir d'Gefrierlagerung.
Notizen
Gitt w.e.g. déi néideg PPE, sou Labo Mantel an Handschuesch, fir Är Gesondheet a Sécherheet ze garantéieren.