Rnase Inhibitor
Murine RNase Inhibitor ass e rekombinante murine RNase Inhibitor ausgedréckt a gereinegt aus E.coli.Et bindt sech un RNase A, B oder C an engem 1: 1 Verhältnis duerch net-kovalent Bindung, doduerch d'Aktivitéit vun den dräi Enzymen hemmt an d'RNA virun der Degradatioun schützt.Wéi och ëmmer, Et ass net effektiv géint RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H oder RNase vun Aspergillus.Murine RNase inhibitor war vun RT-Hinnen alleguer getest, RT-qPCR an IVT mRNA, a war kompatibel mat verschiddene kommerziell ëmgedréint transcriptases, DNA polymerases an RNA polymerases.
Am Verglach mat mënschlechen RNase Inhibitoren enthält murine RNase Inhibitor keng zwee Cysteine déi héich empfindlech op Oxidatioun sinn, wat d'Inaktivéierung vum Inhibitor verursaacht.Dat mécht et stabil bei niddrege Konzentratioune vun DTT (manner wéi 1 mM).Dës Fonktioun mécht et gëeegent fir Reaktiounen ze benotzen wou héich Konzentratioune vun DTT der Reaktioun negativ ass (zB Echtzäit RT-PCR).
AApplikatioun
Dëst Produkt ka wäit an all Experiment benotzt ginn wou RNase Interferenz méiglech ass fir RNA Degradatioun ze vermeiden, sou wéi:
1.Synthese vum éischte Strang vun cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, etc.
2.Schützt RNA vun der Degradatioun wärend der In vitro Transkriptioun / Iwwersetzung (zB In vitro virale Replikatiounssystem).
3.Inhibitioun vun der RNase Aktivitéit wärend der RNA Trennung a Reinigung.
Stockage Konditiounen
D'Produkt kann bei -25～- 15 ℃ gespäichert ginn, gëlteg fir 2 Joer.
Stockage Puffer
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7,6, 25 ℃), 8 mM DTT an 50% Glycerol.
Eenheet Definitioun
D'Quantitéit vun murine RNase inhibitor néideg der Aktivitéit vun 5ng vun ribonuclease A vun 50% ze inhibit war als eng Eenheet (U) definéiert.
Molekulare Gewiicht vum Protein
D'molekulare Gewiicht vum murine RNase Inhibitor ass 50 kDa.
Qualitéitskontroll
Exonuklease Aktivitéit:
40 U vu murine RNase-Inhibitor mat 1 μg λ -Hind III Verdauungs-DNA bei 37 ℃ fir 16 Stonnen gëtt keng Degradatioun wéi bestëmmt duerch Agarosegel Elektrophorese.
Endonuklease Aktivitéit:
40 U vu murine RNase Inhibitor mat 1μ g λ DNA bei 37 ℃ fir 16 Stonnen gëtt keng Degradatioun wéi bestëmmt duerch Agarosegel Elektrophorese.
Nicking Aktivitéit:
40U vu murine RNase Inhibitor mat 1μ g pBR322 bei 37 ℃ fir 16 Stonnen gëtt keng Degradatioun wéi bestëmmt duerch Agarosegel Elektrophorese.
RNase Aktivitéit:
40U vu murine RNase Inhibitor mat 1.6μ g MS2 RNA fir 4h bei 37 ℃ gëtt keng Degradatioun wéi bestëmmt duerch Agarosegel Elektrophorese.
E.coli DNA:
40 U vu murine RNase Inhibitor gëtt op d'Präsenz vun E. coli genomesch DNA gescannt mat TaqMan qPCR mat Primer spezifesch fir den E. coli 16S rRNA Locus.D'E. coli genomesch DNA Kontaminatioun ass ≤ 0,1 pg / 40 U.
Notts
1.Violent Schwéngung oder Rühr féiert zu Enzyminaktivéierung.
2.Den optimale Temperaturbereich vun dësem den Inhibitor war 25-55 ℃, an Et gouf bei 65 ℃ a méi héich inaktivéiert.
3.D'Aktivitéite vun RNase H, RNase 1 an RNase T1 goufen net vun murine RNase inhibitor inhibited.
4.D'Inhibitioun vun der RNase Aktivitéit gouf an enger breeder Palette vu pH fonnt (pH 5-9 waren all aktiv), an déi héchst Aktivitéit gouf bei pH 7-8 observéiert.
5.Zënter Ribonukleasen typesch Aktivitéit ënner denaturéierende Bedéngungen behalen, muss oppassen fir denaturéierend RNase Inhibitor Moleküle ze vermeiden, déi mat enger Ribonuklease komplexéiert hunn.Fir d'Verëffentlechung vun aktive Ribonuklease ze vermeiden, sollten Temperaturen méi wéi 50 °C an héich Konzentratioune vun Harnstoff oder aner Denaturéierungsmëttel vermeit ginn.
