UDG/UNG Enzymen
UDG (uracil DNA glycosylase) kann d'Hydrolyse vun der N-glycosidic Verbindung tëscht der uracil Basis an der Zocker-phosphat Réckemuerch an ssDNA an dsDNA katalyséieren.Et kann einfach Aerosol Verschmotzung kontrolléieren an ass gëeegent fir gemeinsam molekulare Biologie Systemer wéi PCR, qPCR, RT-qPCR a LAMP.
Spezifikatioune
| Expression Host | Rekombinant E. coli mat Uracil DNA Glycosylase Gen |
| Molekulare Gewiicht | 24.8kDa |
| Rengheet | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Hëtzt Inaktivéierung | 95 ℃, 5-10 min |
| Eenheet Definitioun | Eng Eenheet (U) ass definéiert wéi d'Quantitéit un Enzym deen erfuerderlech ass fir d'Hydrolyse vu l μg dU-enthaltend dsDNA an 30 Minutten bei 25 ℃ ze katalyséieren. |
Stockage
D'Produkt soll bei -25 ℃ ~ -15 ° C fir zwee Joer gelagert ginn.
Uweisungen
1.Virbereedung vun der PCR Reaktiounsmëschung no folgendem System
| Komponenten | Volumen (μL) | Finale Konzentratioun |
| 10 × PCR Buffer (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/l |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/l |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmol/Leach) | 1 | 0,2 mmol/Lech |
| Schabloun DNA | X | - |
| Primer 1 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 mmol/l |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 mmol/l |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0. 5 | 0.05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Bis zu 50 | - |
Notiz: No den experimentellen Ufuerderunge kann d'Finale Konzentratioun vun dUTP tëscht 0,2-0,6 mmol / L ugepasst ginn, an 0,2 mmol / L dTTP kann selektiv bäigefüügt ginn.
2.Amplifikatioun Prozedur
| Cycle Schrëtt | Temperatur | Zäit | Cyclen |
| dU-enthale Schabloun Degradatioun | 25 ℃ | 10 Minutten | 1 |
| UDG Aktivatioun, Schabloun initial Denaturatioun | 95 ℃ | 5 ~ 10 min | 1 |
| Denaturatioun | 95 ℃ | 10 sec |
30-35 |
| Annealing | 60 ℃ | 20 sec | |
| Erweiderung | 72℃ | 30 sec/kb | |
| Finale Verlängerung | 72℃ | 5 min | 1 |
Notiz: D'Reaktiounszäit bei 25 ° C kann bannent 5-10mins ugepasst ginn no den experimentellen Ufuerderungen.
Notizen
1.UDG ass aktiv an de meeschte PCR Reaktiounsbuffer.
2.Enzyme sollen an enger Äisbox oder op engem Äisbad gelagert ginn wann se benotzt ginn, a solle bei -20 ° C direkt nom Gebrauch gelagert ginn.
3.Gitt w.e.g. déi néideg PPE, sou Labo Mantel an Handschuesch, fir Är Gesondheet a Sécherheet ze garantéieren!
