DNA Extraktioun Mini Kit

Stockage Konditiounen

Store bei -15 ~ -25 ℃ a transportéiert bei Raumtemperatur.

Komponenten

Buffer PIB:DNA bindend Puffer.

Buffer GW:Wäschbuffer;füügt absolute Ethanol mam uginnene Volumen op der Fläsch virum Gebrauch.

Elutiounsbuffer:Elutioun.

FastPure DNA Mini Columns-G:DNA Adsorptioun Kolonnen.

Sammlung Tubes 2 ml:Sammelrohren fir Filtrat.

Preparéiert Material

1,5 ml steriliséierte Réier, absolut Ethanol an Isopropanol (wann DNA Fragment ≤100 bp, add 1 Volumen

Isopropanol op 1 Volumen Gel), Waasserbad.

Experimenter Prozess

Füügt 80 ml Ethanol fir de Buffer GW ze verdënnen wéi op der Tag virum Gebrauch uginn, späichert bei Raumtemperatur.

Mechanismus

1. PCR Reaktioun Léisung

Gel Extraktioun Schema: Füügt gläiche Volumen Buffer GDP PCR Reaktiounsléisung Erhuelung Schema:Füügt 5 Mol de Volume Buffer

2. PIB Berechent de Volume vum Gel (100  μl entsprécht 100 mg)

Gel opléisen

3. Virhëtzen op 50 ~ 55℃

4. Bind Wäsch

300 μL Buffer PIB derbäi*

Add 700 μL Buffer GW

Add 700 μL Buffer GW

5. Elut

Füügt 20 - 30μL Elutiounsbuffer oder deioniséiertem Waasser

Notizen * PCR Reaktiounsflëssegkeet Erhuelung ouni dëse Schrëtt

Gel Extraktioun Programm

1. No der DNA Elektrophorese fir d'DNA Fragmenter ze fraktionéieren, schneide den eenzege Sträif vum DNA Fragment aus dem Agarosegel ënner UV Liicht.Et ass recommandéiert absorbéierend Pabeier ze benotzen fir scheinbar Feuchtigkeit vum Gel ze absorbéieren an d'Gréisst vum Gel Slice ze minimiséieren andeems Dir extra Agarose wéi méiglech ewechhuelt wéi méiglech.Waacht d'Gel Slice (ouni Mikrocentrifuge-Röhre) fir säi Volumen ze berechnen: De Volume vun 100 mg Gelslice ass ongeféier 100 μL, unzehuelen datt d'Dicht 1g / ml ass.

2. Füügt gläiche Volumen Buffer PIB, inkubéiert bei 50 ~ 55 ℃ fir 7-10 min (no der Gelgréisst, passt d'Inkubatiounszäit un bis de Gel komplett opgeléist ass).Invertéiert d'Tube 2 Mol wärend der Inkubatioun.

Δ Zousatz vun 1-3 Bänn vum Buffer-BIP wäert d'Effizienz vun der DNA Erhuelung net beaflossen.Wann d'DNA-Fragment fir ze recuperéieren <100 bp, mussen 3 Bänn vum Buffer-BIP dobäigesat ginn;wann d'Gel Slice komplett opgeléist ass, fügen Se 1 Volumen Isopropanol derbäi a grëndlech mëschen, da fuert weider op den nächste Schrëtt.

3. Zentrifuge kuerz fir d'Probe op de Buedem vum Röhre ze bréngen, setzt d'FastPure DNA Mini Columns-G an d'Sammlungstubes 2 ml, suergfälteg d'Léisung maximal 700 μL eemol eng

Zäit op d'Filtratiounssäulen, centrifuge bei 12.000 RPM (13.800 X g) fir 30-60 Sekonnen.

4. Gitt d'Filtrat of a füügt 300 μL Buffer PIB an d'Kolonn, inkubéiert bei Raumtemperatur fir 1 min, centrifugéiert bei 12.000 RPM (13.800 X g) fir 30-60 Sekonnen.

5. Gitt d'Filtrat of a fügen 700 μL Buffer GW (kuckt ob absolut Ethanol am Viraus bäigefüügt ass!) An d'Kolonn, centrifuge bei 12.000 RPM (13.800 X g) fir 30-60 Sekonnen.

Δ Füügt w.e.g. Buffer GW ronderëm d'Adsorptiounskolonnemauer derbäi, oder füügt de Buffer GW Réckdeck bäi a vermëschen et op der Kopp fir 2 - 3 Mol fir ze hëllefen d'Salz komplett un d'Röhremauer ze spülen.

6. Widderhuelen Schrëtt 5.

Δ Spülen mat Buffer GW zweemol kann suergen datt d'Salz komplett ewechgeholl gëtt an den Impakt op spéider Experimenter eliminéiert.

7. Gitt d'Filtrat of a centrifugéiert déi eidel Kolonn bei 12.000 rpm (13.800 X g) fir 2 min.

8. Setzt d'Kolonn an e proppert 1,5 ml Mikrocentrifuge-Röhre, add 20 - 30 μL Elutiounsbuffer an d'Mëtt vun der Kolonnmembran, inkubéiert fir 2 min, an centrifugéiert dann bei 12.000 rpm (13.800 X g) fir 1 min.Gitt d'Kolonn of, späichert déi kritt DNA bei -20.

Δ Iwwerdroung vum Supernatant vum Schrëtt 8 op d'Kolonn fir erëm ze elueren an den Elutiounsbuffer op 55 virhëtzen (wann DNA Fragment>3 kb) vläicht hëllefräich ass fir d'Erhuelungseffizienz ze erhéijen.

PCR Produkter Erhuelung Programm

Dëse Protokoll ass uwendbar fir DNA Fragmenter aus PCR Produkter, enzymatesche Reaktiounssystem an aner DNA Rohprodukter (och genetesch DNA) ze purifizéieren.Dës Léisung kann effizient verschidde Nukleotiden, Primer, Primerdimer, Salzmoleküle, Enzymen an aner Gëftstoffer ewechhuelen.

1. Kuerz Zentrifuge PCR Produkter, enzymatesch Reaktiounsléisung an aner DNA Rohprodukter.Schätzen hire Volume mat Pipette an Transfert op eng steriliséiert 1,5 ml oder 2 ml Rouer.Add ddH2O bis de Volume bis 100 μL;wärend fir genomesch DNA mat héijer Konzentratioun, Verdünnung op 300 μL mat ddH2O hëlleft d'Erhuelungseffizienz ze verbesseren.

2. Füügt 5 Bänn vum Buffer PIB, grëndlech vermëschen duerch Invertéieren oder Vortex.Wann DNA Fragment vun Interessi> 100 bp, zousätzlech 1,5 Bänn (Proben + Buffer PIB) vun Ethanol muss dobäi ginn.

3. Setzt d'Kolonn zréck an d'Sammlungsröhre, transferéiert d'Mëschung an d'Kolonn, centrifugéiert bei 12.000 RPM (13.800 × g) fir 30 - 60 Sekonnen.Wann de Volume vun der gemëschter Léisung> 700 µL ass, setzt d'Adsorptiounskolonne zréck an d'Sammlungsröhre, transferéiert déi verbleiwen Léisung an d'Adsorptiounskolonn, an centrifugéiert bei 12.000 RPM (13.800 × g) fir 30 - 60 Sekonnen.

4. Déi nächst Leeschtung bezitt sech op de Schrëtt 5 - 8 vun 08- 1 / Gel Extraktioun Programm.