One Step RT-qPCR SYBR Green Premix
Cat No: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix ass fir Fluoreszenzquantifikatioun baséiert op SYBR Green I Dye.Mat Gen-spezifesche Primer, ëmgedréint Transkriptioun a qPCR Reaktiounen ginn an engem Rouer ofgeschloss, wat d'Noutwennegkeet fir widderholl Cap-Ouverture a Pipetting Operatiounen eliminéiert, d'Assayeffizienz staark verbessert an de Risiko vu Kontaminatioun reduzéiert.Fir RNA Proben benotzt de Kit Hëtztbeständeg Reverse Transkriptase fir effizient cDNA Synthese an HotStart Taq DNA Polymerase fir quantitativ Amplifikatioun.Ënnert dem optimiséierte Puffersystem kann d'Sensibilitéit vum Kit esou héich sinn wéi 0,1 pg fir héich ausgedréckte Ziler an esou héich wéi 1 pg fir mëttelméisseg ausgedréckt Ziler.De Kit ass gëeegent fir d'Verstäerkung an d'Quantifikatioun vun DNA Proben.Et erméiglecht d'sensibel Detektioun an d'Quantifikatioun vun Nukleinsäuren aus verschiddene Planzen- an Déiereproben, Zellen a Mikroorganismen.
Komponenten
| No | Numm | Volumen | Volumen |
| 1 | Fortgeschratt Buffer | 250 l | 2 × 1,25 ml |
| 2 | Fortgeschratt Enzymmix | 20 μL | 200 l |
| 3 | RNase Fräi H2O | 250 l | 2 × 1,25 ml |
Stockage Konditiounen
Dëst Produkt soll bei -25 ~ -15 ℃ ewech vum Liicht fir 1 Joer gelagert ginn.
Uweisungen
1.Reaktioun System Configuratiound
| Komponenten | Volumen (μL) | Volumen (μL) | Finale Konzentratioun |
| Fortgeschratt Buffer | 12.5 | 25 | 1× |
| Fortgeschratt Enzymmix | 1 | 2 | - |
| Forward Primer (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 mmol/l |
| Reverse Primer (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 mmol/l |
| RNA Tamplateb | X | X | - |
| RNase Fräi H2Oc | zu 25 | zu 50 | - |
Notizen:
1) a.Td'final Primer Konzentratioun war 0,2 μmol / L, déi och tëscht 0,1 an 1 μmol / L ugepasst ka ginn.
2) b.De Reagens ass extrem sensibel, mat Total RNA am Beräich vun 1pg-1μg, an Tester vu mënschleche Proben hunn en optimalen Input vun 1 pg-100 ng gewisen, kontrolléiert fir e Gesamt Ct Wäert am Beräich vun 15-30 wéi passend.
3) c.Et ass recommandéiert 20μL oder 50μL ze benotzen fir d'Validitéit an d'Reproduzibilitéit vun der Zilgen-Amplifikatioun ze garantéieren.
4) d.Bereet Iech w.e.g. an der ultra-propper Bänk a benotzt Nuklease-Reschtfräi Tipps a Reaktiounsröhre;Tipps mat Filterpatrounen sinn recommandéiert.Vermeiden Kräizkontaminatioun an Aerosolkontaminatioun.
2.Reaktioun Programm
| Cycle Schrëtt | Temp. | Zäit | Cyclen |
| Reverse Transkriptioun | 50 ℃a | 6 min | 1 |
| Éischt Denaturatioun | 95 ℃ | 5 min | 1 |
| Amplifikatioun Reaktioun | 95 ℃ | 15 sec | 40 |
| 60 ℃b | 30 sec | ||
| Schmelzkurve Etapp | Instrument Default | 1 | |
Notizen:
1) a.Déi ëmgedréint Transkriptiounstemperatur kann tëscht 50-55 ° C ausgewielt ginn no den experimentellen Bedierfnesser.Fir DNA Echantillon kann de ëmgedréint Transkriptiounsprozess ewechgelooss ginn.
2) b.A spezielle Fäll kann d'Glühungs-/Verlängerungstemperatur no dem Primer Tm-Wäert ugepasst ginn, 60°C gëtt recommandéiert.
Notizen
1. Dëst Produkt ass nëmme fir Fuerschung benotzt.
2. Bedreiwen w.e.g. mat Labo-Mäntel a Wegwerfhandschuesch, fir Är Sécherheet.
