Wild Taq DNA Polymerase
Taq DNA Polymerase ass eng thermostabil DNA Polymerase aus Thermus aquaticus YT-1, déi eng 5'→3' Polymerase Aktivitéit an eng 5' Klappe Endonuclease Aktivitéit huet.
Komponenten
| Komponent | HC1010 A-01 | HC1010 A-02 | HC1010 A-03 | HC1010 A-04 |
| 10 × Taq Buffer | 2 × 1 ml | 2 × 10 ml | 2 × 50 ml | 5 × 200 ml |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 mll | 5ml vun | 5 × 10 ml |
Stockage Zoustand
Transport ënner 0 ° C a bei -25 ° C ~ -15 ° C gelagert ginn.
Eenheet Definitioun
Eng Eenheet ass definéiert wéi d'Quantitéit un Enzym deen 15 nmol dNTP an sauer onopléisbar Material an 30 Minutte bei 75 ° C integréiert.
Qualitéitskontroll
1.Protein Purity Assay (SDS-PAGE):D'Rengheet vun Taq DNA polymerase war ≥95% vun SDS-PAGE Analyse bestëmmt.
2.Endonuclease Aktivitéit:E Minimum vu 5 U vun Taq DNA Polymerase mat 1 μg λDNA fir 16 Stonnen bei 37 ℃ Resultater zu keng detektéierbar Degradatioun wéi bestëmmt.
3.Exonuclease Aktivitéit:E Minimum vu 5 U vun Taq DNA Polymerase mat 1 μg λ -Hind Ⅲ Verdauung DNA fir 16 Stonnen bei 37 ℃ Resultater zu keng detektéierbar Degradatioun wéi bestëmmt.
4.Nickase Aktivitéit:E Minimum vu 5 U vun Taq DNA Polymerase mat 1 μg pBR322 DNA fir 16 Stonnen bei 37 ° C Resultater zu keng detektabel Degradatioun wéi bestëmmt.
5.RNase Aktivitéit:E Minimum vu 5 U vun Taq DNA Polymerase mat 1,6 μg MS2 RNA fir 16 Stonnen bei 37 ° C Resultater zu keng detektabel Degradatioun wéi bestëmmt.
6.E. coliDNA:5 U vun Taq DNA Polymerase gëtt fir d'Präsenz vun E. coli genomesch DNA gescannt mat TaqMan qPCR mat Primer spezifesch fir den E. coli 16S rRNA Locus.D'E. coli genomesch DNA Kontaminatioun ass ≤1 Kopie.
7.PCR Amplifikatioun (5.0 kb Lambda DNA)- Eng 50 µL Reaktioun mat 5 ng Lambda DNA mat 5 Eenheeten Taq DNA Polymerase fir 25 Zyklen vun der PCR Amplifikatioun resultéiert am erwaarten 5.0 kb Produkt.
Reaktioun Setup
| Komponenten | Volumen |
| Schabloun DNAa | fakultativ |
| 10 μM Forward Primer | 1 μl |
| 10 μM Reverse Primer | 1 μl |
| dNTP Mix (10 mM jeweils) | 1 μl |
| 10 × Taq Buffer | 5 μl |
| Taq DNA Polymeraseb | 0,25 μL |
| Nuklease-gratis Waasser | Bis zu 50 μL |
Notizen:
1) Déi optimal Reaktiounskonzentratioun vu verschiddene Templates ass anescht.Déi folgend Tabell weist d'recommandéiert Schablounverbrauch vum 50 µL Reaktiounssystem.
| DNA | Betrag |
| Genomesch | 1 ng-1 μg |
| Plasmid oder Viral | 1 pg-1 ng |
2) Déi optimal Konzentratioun vun Taq DNA Polymerase ka variéieren vun 0,25 µL ~ 1 µL a spezialiséierten Uwendungen.
ReaktiounProgramm
| Schrëtt | Temperatur(°C) | Zäit | Cyclen |
| Éischt Denaturatiouna | 95 ℃ | 5 min | - |
| Denaturatioun | 95 ℃ | 15-30 Uhr | 30-35 Zyklen |
| Annealingb | 60 ℃ | 15 s | |
| Erweiderung | 72 ℃ | 1 kb/min | |
| Finale Extensioun | 72 ℃ | 5 min | - |
Notizen:
1) Den initialen Denaturatiounskonditioun ass gëeegent fir déi meescht Amplifikatiounsreaktiounen a ka geännert ginn no der Komplexitéit vun der Schablounstruktur.Wann d'Schablounstruktur komplex ass, kann d'Pre-Denaturatiounszäit op 5 - 10mins verlängert ginn fir den initialen Denaturatiounseffekt ze verbesseren.
2) D'annealing Temperatur muss no der Tm Wäert vun der primer ugepasst ginn, déi allgemeng op 3 ~ 5 ℃ manner wéi den Tm Wäert vun der primer gesat ass;Fir komplex Templates ass et néideg d'Annealtemperatur unzepassen an d'Verlängerungszäit ze verlängeren fir effizient Verstärkung z'erreechen.
